[發明專利]一種福建蓮座蕨離體保存培養基及離體保存方法

有效

• 申請號: 202011175008.3
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112293253B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 何俊;李村富;李春芳
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

1.一種福建蓮座蕨離體保存方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)收集福建蓮座蕨羽片中的棕色孢子囊，滅菌后與水混合，制備孢子懸浮液；所述滅菌包括：在無菌環境中，將收集的棕色孢子囊用體積百分含量為75％的乙醇溶液浸泡20s，再置于質量百分含量為0.2％的氯化汞水溶液中滅菌4min，無菌水漂洗4～5次；

(2)將所述孢子懸浮液接種至孢子無菌萌發培養基上進行萌發培養，得幼原葉體；所述孢子無菌萌發培養基以1/10MS培養基為基本培養基，還包括：蔗糖20g/L和瓊脂6g/L，pH值為5.8；所述萌發培養的溫度為25±2℃，光照強度為1000lx，光照時間為12h/d；

(3)將所述幼原葉體接種于增殖培養基上進行增殖培養，得原葉體團；所述增殖培養基以1/2MS培養基為基本培養基，還包括：蔗糖20g/L和瓊脂6g/L，pH值為5.8；所述增殖培養的溫度為25±2℃，光照強度為1000lx，光照時間為12h/d；

(4)將所述原葉體團轉接至福建蓮座蕨離體保存培養基上進行離體保存；所述離體保存培養基由以下成分組成：花寶2號3g/L、NAA 0.5mg/L、蔗糖20g/L、活性炭1g/L和瓊脂6g/L，pH值為5.8；所述離體保存的溫度為25±2℃，光照強度為1000lx，光照時間為12h/d。

2.根據權利要求1所述離體保存方法，其特征在于，步驟(1)所述收集包括：采集無病蟲害且著生有棕色孢子囊但未開裂的福建蓮座蕨小羽片，在解剖鏡下取下完整孢子囊裝入經滅菌的DNA純化柱中，所取孢子囊數量為40個/DNA純化柱。

3.根據權利要求1所述離體保存方法，其特征在于，將經所述滅菌的棕色孢子囊與無菌水混合，刺破孢子囊，形成孢子懸浮液。

4.根據權利要求1所述離體保存方法，其特征在于，所述增殖培養時，每30天繼代一次。