[發明專利]阿魏菇中抗腫瘤蛋白提取物及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202011168193.3
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112321670B
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 劉方;劉夢函
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/18;C07K1/30;A61K38/02;A61P35/00
• 代理公司: 天津耀達律師事務所 12223
• 代理人: 侯力

1.阿魏菇中抗腫瘤蛋白提取物，其特征在于所述的抗腫瘤蛋白提取物來源于阿魏菇，是子實體烘干研磨成粉后，經浸提、鹽析、透析、凍干、離子交換而獲得的分子量為17.5kDa的單體蛋白；所述抗腫瘤蛋白提取物對人非小細胞肺腺癌細胞株A549具有抗增殖作用和誘導腫瘤細胞凋亡的作用；所述抗腫瘤蛋白提取物通過如下步驟制備而成：

1)將阿魏菇子實體50～70℃烘干去除水分后研磨成粉末，溶解于蒸餾水溶液中，18～23℃浸提8～16小時，4000～8000rpm離心10～20min，收集上清液；

2)向上清液中加入(NH₄)₂SO₄至飽和度為80％，2～6℃放置8～16小時，8000～12000rpm離心15～25min，收集沉淀，即得阿魏菇蛋白粗提物；

3)將阿魏菇蛋白粗提物用蒸餾水溶解，然后在2～6℃、5～10倍重量的蒸餾水中透析24～72小時，每間隔4小時更換一次蒸餾水，透析后10000～14000rpm離心15～25min收集上清液并進行冷凍干燥，即得阿魏菇蛋白粗粉；

4)將阿魏菇蛋白粗粉溶解于10～50mM、pH6.0～8.0的Tris-HCl緩沖液中，上樣于HiTrapQHP強陰離子交換柱，用含1mol/LNaCl的10～50mM、pH6.0～8.0Tris-HCl緩沖液線性洗脫，收集洗脫峰；

5)將洗脫峰組分冷凍干燥后溶于10～50mM、pH6.0～8.0的Tris-HCl緩沖液中，上樣于DEAE-52弱陰離子交換柱，用含0.03mol/LNaCl的10～50mM、pH6.0～8.0Tris-HCl緩沖液洗脫，收集該濃度下的洗脫峰，獲得阿魏菇抗腫瘤蛋白提取物。

2.權利要求1所述的阿魏菇中抗腫瘤蛋白提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)將阿魏菇子實體50～70℃烘干去除水分后研磨成粉末，溶解于蒸餾水溶液中，18～23℃浸提8～16小時，4000～8000rpm離心10～20min，收集上清液；

2)向上清液中加入(NH₄)₂SO₄至飽和度為80％，2～6℃放置8～16小時，8000～12000rpm離心15～25min，收集沉淀，即得阿魏菇蛋白粗提物；

3)將阿魏菇蛋白粗提物用蒸餾水溶解，然后在2～6℃、5～10倍重量的蒸餾水中透析24～72小時，每間隔4小時更換一次蒸餾水，透析后10000～14000rpm離心15～25min收集上清液并進行冷凍干燥，即得阿魏菇蛋白粗粉；

4)將阿魏菇蛋白粗粉溶解于10～50mM、pH6.0～8.0的Tris-HCl緩沖液中，上樣于HiTrapQHP強陰離子交換柱，用含1mol/LNaCl的10～50mM、pH6.0～8.0Tris-HCl緩沖液線性洗脫，收集洗脫峰；

5)將洗脫峰組分冷凍干燥后溶于10～50mM、pH6.0～8.0的Tris-HCl緩沖液中，上樣于DEAE-52弱陰離子交換柱，用含0.03mol/LNaCl的10～50mM、pH6.0～8.0Tris-HCl緩沖液洗脫，收集該濃度下的洗脫峰，獲得阿魏菇抗腫瘤蛋白提取物。

3.根據權利要求2所述的阿魏菇中抗腫瘤蛋白提取物的制備方法，其特征在于，步驟1)中阿魏菇子實體粉末與蒸餾水的料液比為1:10。

4.根據權利要求2或3所述的阿魏菇中抗腫瘤蛋白提取物的制備方法，其特征在于，步驟1)中的優選條件是，烘干溫度55℃，22℃浸提12小時，4000rpm離心20min。

5.根據權利要求2或3所述的阿魏菇中抗腫瘤蛋白提取物的制備方法，其特征在于，步驟2)中的優選條件是，加入硫酸銨至飽和度為80％，4℃放置12小時，10000rpm離心20min。

6.根據權利要求2或3所述的阿魏菇中抗腫瘤蛋白提取物的制備方法，其特征在于，步驟3)中的優選條件是，在2℃、5倍重量的蒸餾水中透析72小時，透析后14000rpm離心15min。