[發明專利]一種用于絲素蛋白檢測的免疫傳感器修飾電極的制備方法

有效

• 申請號: 202011167281.1
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112415070B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 陳博逸;徐城鋒;黃詩瑩;陳栩詩;王秉
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48;G01N33/543;G01N33/68;B82Y15/00;B82Y30/00;B82Y40/00;C01B32/198
• 代理公司: 浙江永航聯科專利代理有限公司 33304
• 代理人: 蔡鼎

1.一種用于絲素蛋白檢測的免疫傳感器修飾電極的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

步驟1：氧化石墨烯的制備：將石墨粉和高錳酸鉀分別加入到濃硫酸中，兩者混合后超聲分散，將其置于水浴中攪拌，再將其加入到水中，加入過氧化氫溶液，隨后離心，向離心所得固體混合物加水混合，隨后在細胞粉碎儀中超聲 離心處理，取上層黑色液體，得到GO懸浮液；

步驟2：含醛基的離子液體的制備：在室溫下以恒定攪拌速率將1，8二溴辛烷滴加至乙腈中，隨后逐滴滴加4-吡啶甲醛；將混合均勻后所得混合物在惰性環境中攪拌回流反應；反應結束后，收集產物并離心處理，洗滌，干燥后得到含醛基的離子液體；

步驟3：GO-IL復合材料溶液的制備：取GO懸浮液，加入含醛基的離子液體，在細胞粉碎儀中超聲處理，隨后收集所得混合溶液，得到GO-IL復合材料溶液；

步驟4：金納米顆粒溶液的制備：量取氯金酸溶液置于容器中，在恒溫水浴中邊加熱邊攪拌，隨后繼續加熱至沸騰，逐滴滴加檸檬酸三鈉溶液，對容器封口后持續反應，停止加熱，冷卻至室溫，所得溶液為金納米顆粒溶液；

步驟5：GO-IL修飾電極的制備方法：將玻碳電極置于麂皮上，加入納米氧化鋁和超純水進行拋光打磨，隨后用無水乙醇和去離子水分別超聲處理，保證玻碳電極打磨干凈；在玻碳電極表面滴加GO-IL復合材料溶液，干燥后得到GO-IL修飾電極；

步驟6：GO-IL@AuNPs修飾電極的制備：在干燥后的GO-IL修飾電極上滴加金納米顆粒溶液，干燥后即得GO-IL@AuNPs修飾電極，即用于絲素蛋白檢測的免疫傳感器修飾電極。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1具體為：將石墨粉和高錳酸鉀按1:1的質量比稱取2-3g，之后分別加入到50-60 mL濃硫酸中，兩者混合后超聲分散10-20 min，將其置于50-60℃的水浴中攪拌3-5h，再將其加入到350-450 mL的去離子水中，加入35-45mL的25-35wt%過氧化氫溶液，離心處理，將350-450 mL的去離子水加入到離心所得混合物中，在細胞粉碎儀中超聲70-90 min，將超聲后溶液在3000-5000 rpm轉速下離心10-30min，取上層黑色液體即得到GO懸浮液。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2中，1，8二溴辛烷、乙腈和4-吡啶甲醛用量比為（8-10g）:（7-9g）:（45-55mL）。

4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2中，所述恒定攪拌速率為400-600r/min；反應溫度為70-90℃，反應時間為20-30h；反應結束后，離心轉速為8000-12000rp。

5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3中，GO懸浮液與含醛基的離子液體的用量比為（1-2mL）:（20-30mg）。

6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3中，超聲時間為2-2.5h。

7.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4中，氯金酸溶液的濃度為0.8-1.2mM，檸檬酸三鈉溶液的濃度為0.1-0.12M；氯金酸溶液與檸檬酸三鈉溶液的體積比為150:（40-45）。

8.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4中，恒溫水浴溫度為95-105℃；反應時間為10-30min，金納米顆粒制備成功的標志為溶液變為酒紅色。

9.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟5中，拋光打磨時間為5-15min，待對電極進行循環伏安法測試后，氧化還原峰的間距小于100 mV，電極表面視為打磨干凈；超聲處理時間為5-15min；在玻碳電極表面滴加1-5μL的GO-IL復合材料溶液，干燥溫度為30-40℃；滴加GO-IL時在圓形反光范圍內滴加。

10.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟6中，在干燥后的GO-IL修飾電極上滴加1-5μL的金納米顆粒溶液，干燥溫度為30-40℃。