[發(fā)明專利]Wxc型糯高粱的ARMS-PCR引物及其分子檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011165598.1
• 申請(qǐng)日: 2020-10-27
• 公開（公告）號(hào): CN112176093A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅愛民;鄧銳杰;朱小穎;吳茗花
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 宮建華

1.Wxc型糯高粱的ARMS-PCR引物，包括Wxc-F、Wxc-R，其核酸序列分別如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示。

2.Wxc型糯高粱的ARMS-PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)ARMS-PCR引物對(duì)Wxc-F、Wxc-R的設(shè)計(jì)；

(2)樣品總DNA的提取，利用S1的引物進(jìn)行ARMS-PCR擴(kuò)增反應(yīng)；

(3)采用瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，根據(jù)凝膠成像系統(tǒng)上成像判定檢測(cè)結(jié)果，若有條帶生成，則表明該樣品中含Wxc型糯高粱；若無條帶生成，則表明該樣品中不含Wxc型糯高粱。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的Wxc型糯高粱的ARMS-PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)中，所述擴(kuò)增反應(yīng)的體系：10μL 2×PCR Master，1μL DNA模板，1μL Wxc-F，1μL Wxc-R，SterileddH₂O補(bǔ)齊到20μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的Wxc型糯高粱的ARMS-PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)中，所述擴(kuò)增反應(yīng)的條件為：94℃預(yù)變性3min，之后進(jìn)行32個(gè)循環(huán)的94℃30s、50℃30s、72℃30s，最后進(jìn)行72℃終止延伸7min。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的Wxc型糯高粱的ARMS-PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)中，所述瓊脂糖凝膠電泳判別的方法是：取5μL的ARMS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，加入1μL 6×Loadingbuffer，混勻，加入到3％的瓊脂糖凝膠中，于150V電壓下電泳30min，在凝膠成像系統(tǒng)上成像觀察結(jié)果。