[發明專利]一種用于JCPyV檢測與分型的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202011164715.2
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112442553A
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發明（設計）人: 歐銅;徐銀燕;吳松
• 申請（專利權）人: 深圳市羅湖區人民醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6858;C12R1/93
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙) 44268
• 代理人: 徐凱凱

本發明公開一種用于JCPyV檢測與分型的試劑盒及方法，其中，所述試劑盒包括序列如SEQ ID.1所示的上游引物，序列如SEQ ID.2所示的下游引物，序列如SEQ ID.3所示的第一探針，序列如SEQ ID.4所示的第二探針，所述第一探針用于結合于JCPyV野生型NCCR序列，所述第二探針用于結合JCPyV突變型NCCR序列。本發明提供的試劑盒能夠有效檢測JCPyV并對其分為野生型和突變型，其具有操作簡單、靈敏度高、特異性高和成本低等優點，非常適用于臨床JCPyV的快速檢測與分型。

技術領域

本發明涉及病毒檢測領域，特別涉及一種用于JCPyV檢測與分型的試劑盒及方法。

背景技術

JCPyV屬于多瘤病毒科，基因組為環狀雙鏈DNA，全長約5.1kb。根據基因序列的作用及編碼產物的表達時序，可以大體將其基因組分為早期編碼區、晚期編碼區和非編碼基因調控區(noncoding control region，NCCR)。NCCR是JCPyV基因組的易變異區，大小約為400bp,包括病毒DNA復制起始位點、病毒蛋白轉錄TATA盒、宿主細胞DNA與轉錄因子結合位點、啟動子與增強元件以及病毒大T抗原結合位點。

JCPyV在一些表達其復制轉錄因子的細胞(如神經膠質細胞)內進行烈性感染，復制病毒基因組，轉錄表達病毒結構蛋白,組裝子代病毒，裂解宿主細胞，在機體免疫嚴重受損的情況下導致疾病發生，如進行性多病灶腦白質病。而在絕大部分情況下，JCPyV呈隱形感染，無明顯臨床癥狀，免疫逃避的病毒粒子常潛伏于泌尿系統上皮組織，在部分健康成人尿液中能檢測到病毒核酸。目前，在腦癌、結直腸癌、胃癌等多種腫瘤組織中都有檢測到JCPyV基因組及大T抗原表達。流行病學研究與Mata分析表明病毒等病原微生物的慢性感染是導致膀胱癌發生發展的重要危險因素之一。目前，針對尿液JCPyV快速檢測及膀胱癌特異性NCCR分型仍主要依賴于PCR擴增與Sanger測序，不便于醫學實驗室進行快速檢測分析。

因此，開發JCPyV快速檢測與非編碼區分型的快速檢測試劑盒具有重要的應用價值。

發明內容

鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種操作簡單、靈敏度高、特異性高其成本較低的用于JCPyV檢測與分型的試劑盒及方法。

本發明的技術方案如下：

一種用于JCPyV檢測與分型的試劑盒，其中，包括序列如SEQ ID.1所示的上游引物，序列如SEQ ID.2所示的下游引物，序列如SEQ ID.3所示的第一探針，序列如SEQ ID.4所示的第二探針，所述第一探針用于結合于JCPyV野生型NCCR序列，所述第二探針用于結合JCPyV突變型NCCR序列。

所述用于JCPyV檢測與分型的試劑盒，其中，所述第一探針的5’端連接有熒光報告基團HEX，3’端連接有熒光猝滅基團BHQ-X。

所述用于JCPyV檢測與分型的試劑盒，其中，所述第二探針的5’端連接有熒光報告基團FAM，3’端連接有熒光猝滅基團BHQ-X。

所述用于JCPyV檢測與分型的試劑盒，其中，還包括10*PCR緩沖液、Mg²⁺、dNTPs以及HSTaq酶。

一種用于JCPyV檢測與分型的方法，其中，包括步驟：

采用本發明所述的試劑盒對待測樣品進行PCR擴增，得到擴增后樣品；

在PCR擴增過程中采用SLAN全自動醫用PCR分析系統自動采集數據模擬生成擴增曲線；

根據所述生成擴增曲線對待測樣品中的JCPyV進行檢測與分型。

有益效果：本發明提供了一種用于JCPyV檢測與分型的試劑盒，該試劑盒能夠有效檢測JCPyV并對其分為野生型和突變型，其具有操作簡單、靈敏度高、特異性高和成本低等優點，非常適用于臨床JCPyV的檢測與分型診斷。

附圖說明