[發明專利]一種Tks4基因敲除鼠的構建方法

有效

• 申請號: 202011164525.0
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112280803B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 何瀟瀟;李勝男;王亙垚;朱筱娟
• 申請（專利權）人: 東北師范大學
• 主分類號: C12N15/89
• 分類號: C12N15/89;A01K67/027
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

1.一種Tks4基因敲除鼠的構建方法，其特征在于，將Cas9 mRNA與sgRNA1、sgRNA9導入小鼠受精卵中，利用sgRNA1和sgRNA9對鼠的Tks4基因進行敲除，獲得Tks4基因敲除鼠；

所述sgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述sgRNA9的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示；

所述對Tks4基因進行敲除是通過剪切Tks4基因的3號外顯子實現的。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述sgRNA1和sgRNA9的質量比為(0.5～1.5):(0.5～1.5)。

3.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述sgRNA1和sgRNA9的質量比為1:1。

4.根據權利要求3所述的構建方法，其特征在于，所述Cas9 mRNA的核苷酸序列如SEQID No.3所示。

5.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述Cas9 mRNA與sgRNA1、sgRNA9的質量比為(1.5～2.5):(0.3～0.8):(0.3～0.8)。

6.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于，所述Cas9 mRNA與sgRNA1、sgRNA9的質量比為2:0.5:0.5。

7.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，使用引物對對Tks4基因敲除鼠進行鑒定，所述引物對的上下游引物的核苷酸序列分別如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示。