[發(fā)明專利]基于RAA技術(shù)檢測鴨腺病毒3型的引物探針組合、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011164496.8
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112176108A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒海濤;馬廣斌;李陽;馬麗;王學(xué)波;李朝陽;李廣森;鹿洪偉;梁棟
• 申請（專利權(quán)）人: 山東信達(dá)基因科技有限公司;山東信得科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京同輝知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11357
• 代理人: 于晶晶

本發(fā)明公開了一種基于RAA技術(shù)檢測鴨腺病毒3型的引物探針組合、試劑盒及檢測方法，引物探針組合依據(jù)鴨腺病毒3型病毒特異性Hexon基因進(jìn)行設(shè)計(jì)，該試劑盒及檢測方法利用上述引物探針組合對待測樣品進(jìn)行RAA反應(yīng)，根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)果判斷待測樣品中是否含有鴨腺病毒3型病毒。該試劑盒及檢測方法應(yīng)用于對鴨腺病毒3型病毒的快速檢測，實(shí)現(xiàn)了對鴨腺病毒3型病毒進(jìn)行準(zhǔn)確、快速、靈敏、方便的檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及鴨腺病毒檢測方法技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種基于RAA技術(shù)檢測鴨腺病毒3型的引物探針組合、試劑盒及檢測方法。

背景技術(shù)

禽腺病毒是全球家禽和野禽常見的傳染病病原體。多數(shù)禽腺病毒可在健康禽體內(nèi)復(fù)制，癥狀非常輕微或不表現(xiàn)感染癥狀，在混合感染時，禽腺病毒可成為條件性病原。近年有研究者從廣東某番鴨場發(fā)病的番鴨中分離出1株新病毒，感染鴨臨床剖檢病變?yōu)楦闻K黃化、質(zhì)地變脆、腫大、出血及壞死，通過高通量測序獲得該病毒的全基因序列(GenBankNo.KR135164.1,CH-GD-12-2014株)，通過基因序列及遺傳進(jìn)化分析將該病原初步命名為鴨腺病毒3型(DAdV-3)。目前關(guān)于該病毒的研究主要圍繞形態(tài)學(xué)、致病性、基因序列分析等，還沒有一種準(zhǔn)確、快速的檢測方法。

針對上述問題，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種基于RAA技術(shù)檢測鴨腺病毒3型的引物探針組合、試劑盒及檢測方法，該試劑盒及檢測方法應(yīng)用于對鴨腺病毒3型病毒的快速檢測，實(shí)現(xiàn)了對鴨腺病毒3型病毒進(jìn)行準(zhǔn)確、快速、靈敏、方便的檢測。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種檢測鴨腺病毒3型的引物探針組合，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

一種檢測鴨腺病毒3型的試劑盒，包括上述的引物探針組合。

優(yōu)選的，上游引物、下游引物和探針的濃度均為10pmol/μL。

優(yōu)選的，還包括RAA反應(yīng)的試劑。

一種基于RAA技術(shù)檢測鴨腺病毒3型病毒的檢測方法，包括如下步驟：

(1)配置陰性對照、陽性對照以及待檢測樣品的RAA反應(yīng)體系，其中，RAA反應(yīng)體系中所使用的引物探針組合為上述的引物探針組合；

(2)RAA反應(yīng)體系擴(kuò)增；

(3)根據(jù)RAA反應(yīng)體系的擴(kuò)增曲線判定待測樣品中是否含有鴨腺病毒3型病毒。

優(yōu)選的，步驟(1)中的RAA反應(yīng)體系為：

RT熒光基礎(chǔ)反應(yīng)單元；

待檢測的樣品DNA模板或鴨腺病毒3型病毒DNA模板或去除RNA酶的水 2μL；

總體積 50μL；

其中，所述RT熒光基礎(chǔ)反應(yīng)單元為凍干粉。

優(yōu)選的，步驟(2)中RAA反應(yīng)體系擴(kuò)增的條件為39℃下恒溫?cái)U(kuò)增20min。

優(yōu)選的，步驟(3)中待測樣品中是否含有鴨腺病毒3型病毒的判定方式為：

在陰性對照RAA反應(yīng)體系經(jīng)擴(kuò)增反應(yīng)后無擴(kuò)增曲線，且陽性對照RAA反應(yīng)體系經(jīng)擴(kuò)增反應(yīng)后出現(xiàn)擴(kuò)增曲線的前提下，待檢測樣品的RAA反應(yīng)體系擴(kuò)增反應(yīng)后具有擴(kuò)增曲線，則樣品為陽性，待檢測樣品的RAA反應(yīng)體系擴(kuò)增反應(yīng)后無擴(kuò)增曲線，則樣品為陰性。