[發明專利]一種匍匐剪股穎的遺傳轉化方法

有效

• 申請號: 202011163653.3
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112175991B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 凌飛;徐慶
• 申請（專利權）人: 武漢天問生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/65;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 湖北天領艾匹律師事務所 42252
• 代理人: 楊建軍

1.一種匍匐剪股穎的遺傳轉化方法，其特征在于，包括以下步驟：將匍匐翦股穎種子消毒處理，通過誘導愈傷，挑選胚性愈傷，繼代培養，預培養，經含有目標質粒的農桿菌侵染及共培養后，再經篩選培養、愈傷分化、生根、煉苗及移栽得到抗草銨膦翦股穎植株；

其中，所述目標質粒帶草銨膦抗性基因；所述農桿菌侵染時間為30min；

所述種子的消毒處理步驟為：經脫殼后的匍匐翦股穎種子用75%（v/v）酒精浸泡1分鐘后，再加入50%（v/v）的84溶液消毒浸泡10分鐘；

所述誘導愈傷步驟采用的培養基組成為：4.43g/L?MS、30g/L?sucrose、500mg/Lcasein?hydrolysate、6.6mg/L?2,4-D、0.5mg/L?6-BA、2g/L?phytagel，PH＝5.7；

所述繼代培養步驟采用的培養基組成為：4.43g/L?MS、30g/L?sucrose、500mg/Lcasein?hydrolysate、6.6mg/L?2,4-D、0.5mg/L?6-BA、8mg/L?phosphinothricin、2g/Lphytagel，PH＝5.7；

所述預培養步驟采用的培養基組成為：4.43g/L?MS、30g/L?sucrose、500mg/L?caseinhydrolysate、6.6mg/L?2,4-D、0.5mg/L?6-BA、100μmol/L?AS、2g/L?phytagel，PH＝5.7；

所述共培養步驟采用的培養基與預培養步驟培養基相同；

所述篩選培養包括第一輪篩選培養和第二輪篩選培養，所述第一輪篩選培養采用的培養基組成為：4.43g/L?MS、30g/L?sucrose、500mg/L?casein?hydrolysate、6.6mg/L?2,4-D、0.5mg/L?6-BA、125mg/L?cefotaxime、250mg/L?carbenicillin、2g/L?phytagel，PH＝5.7；

所述第二輪篩選培養采用的培養基組成為：4.43g/L?MS、30g/L?sucrose、500mg/Lcasein?hydrolysate、6.6mg/L?2,4-D、0.5mg/L?6-BA、250mg/L?cefotaxime、8mg/Lphosphinothricin、2g/L?phytagel，PH＝5.7；

所述愈傷分化步驟采用的培養基組成為：4.43g/L?MS、30g/L?sucrose、100mg/L?myo-inositol、1.0mg/L?6-BA、250mg/L?cefotaxime、8mg/L?phosphinothricin、2g/LPhytagel；

所述生根步驟采用的培養基組成為：2.2g/L?MS、20g/L?sucrose、125mg/Lcefotaxime、4mg/L?phosphinothricin、3g/L?phytagel。

2.根據權利要求1所述的轉化方法，其特征在于，所述目標質粒為pCAMBIA3301。