[發明專利]一種以結締組織生長因子為靶點的全人源拮抗抗體及其應用

有效

• 申請號: 202011159590.4
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112266417B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 王建光;吳淦;金勝威;楊新宇
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: C07K16/22
• 分類號: C07K16/22;C12N15/13;A61K39/395;A61P19/02;A61P29/00
• 代理公司: 溫州名創知識產權代理有限公司 33258
• 代理人: 朱海曉

本發明涉及基因工程和蛋白質工程技術領域，具體涉及一種以結締組織生長因子為靶點的全人源拮抗抗體及其應用。其中以結締組織生長因子為靶點的全人源拮抗抗體，該全人源拮抗抗體為單鏈抗體，其氨基酸序列為SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10所示。本發明通過類風濕關節炎患者ScFv噬菌體抗體庫，篩選出全人源抗CTGF單克隆抗體，并分別測定其核苷酸序列和氨基酸序列，通過該方法獲得的全人源拮抗抗體具有靶向人結締組織生長因子的特異性。

技術領域

本發明涉及基因工程和蛋白質工程技術領域，具體涉及一種以結締組織生長因子為靶點的全人源拮抗抗體及其應用。

背景技術

類風濕關節炎是一種病因復雜且反復發作的自身免疫性疾病，其病理特征表現為關節滑膜慢性炎癥、軟骨吸收、骨質破壞和纖維化，給廣大患者造成了極大的不便及痛苦。由于其病因尚未完全明確，發病機制涉及到遺傳、環境、免疫等多個方面，故而現行藥物難以根治患者，僅僅只能做到對癥治療，即減輕或消除患者因關節炎癥造成的關節紅腫疼痛，控制疾病的發展，減少關節破壞，盡可能保證受累關節的功能。

國內外治療類風濕關節炎的藥物常用包括非甾體抗炎藥(NSAIDs)、改善病情抗風濕藥(DMARDs)、生物制劑、中藥及中藥制劑等。其中抗體類生物制劑常以TNF-α、IL-1、IL-6等作為靶點。由于這些蛋白在維持機體正常免疫功能方面發揮著重要的作用，故而采用其抑制劑作為藥物進行治療的不良反應較為顯著。從人組合抗體庫中采用噬菌體展示等技術能篩選出以細胞膜受體之天然配體為靶點的抑制劑或激活劑，這些抑制劑或激活劑的化學本質是抗體。不僅結構穩定(避免藥物在到達病灶前，在體內被提前降解)，且靶向性良好(可大大減少毒副作用)，更為重要的是：這樣產生的抗體能夠克服雜交瘤技術生產抗體易引起排異反應、制備過程復雜、融合效率不高、抗體產量低、抗體不穩定、穿透力弱的缺點，還能實現高通量、快速篩選抗體的目的，且價格低廉。

人結締組織生長因子是當前發現的與類風濕關節炎發病以及病程進展密切相關的蛋白，但至今未見從人組合抗體庫中采用噬菌體展示等技術篩選以人結締組織生長因子為靶點的抑制劑抗體的文獻和產品。相比現有治療類風濕關節炎的抗體類藥物，人結締組織生長因子為靶點的抗體類抑制劑藥物還處于年輕的上升階段，有很大的開拓空間。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術存在的缺點和不足，而提供一種本發明提供了抗人結締組織生長因子全人源單克隆單鏈抗體ScFv，利用基因工程的方法，在類風濕關節炎患者全人源噬菌體抗體庫中淘選并鑒定出人結締組織生長因子全人源單鏈抗體scFv，其特異性結合人結締組織生長因子。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種以結締組織生長因子為靶點的全人源拮抗抗體，該全人源拮抗抗體為單鏈抗體，其氨基酸序列為SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10所示。

編碼如上述的以結締組織生長因子為靶點的全人源拮抗抗體的基因。

所述基因的核苷酸序列分別為SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19或SEQIDNO:20，分別對應氨基酸序列為SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的全人源拮抗抗體。

一種含有如上述的基因的表達載體。這些表達載體可以選自質粒或病毒。