[發(fā)明專利]一種蛋白桑生產(chǎn)提取的DNJ的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011157525.8
• 申請(qǐng)日: 2020-10-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112062711A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 麻輝;龍安成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 花垣縣紫霞桑蠶研發(fā)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C07D211/46
• 分類號(hào): C07D211/46
• 代理公司: 北京神州信德知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11814
• 代理人: 劉真

本發(fā)明是一種蛋白桑生產(chǎn)提取的DNJ的制備方法，該方法先將桑葉粉末在常溫下采用稀鹽酸浸泡1?2h，得到浸泡液，然后將浸泡液輸入反應(yīng)池沉淀1?2h，反應(yīng)池中設(shè)置超聲波發(fā)生器，浸泡液沉淀的同時(shí)通過(guò)超聲波進(jìn)行擾動(dòng)；再對(duì)上清液進(jìn)行提取，濃縮、干燥獲得DNJ。本發(fā)明將超聲波和酸水提取結(jié)合在一起，能夠在超聲波提取的基礎(chǔ)上，利用酸堿結(jié)合生成鹽的方法，結(jié)合酸溶液快速、有效地對(duì)桑葉中的DNJ進(jìn)行提取，能夠提高桑葉中DNJ的得率和提取率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于DNJ的提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及通過(guò)蛋白桑生產(chǎn)提取的DNJ的制備方法。

背景技術(shù)

DNJ(DeoxyNoJirimyci)是從桑樹(shù)中發(fā)現(xiàn)的一種天然生物堿。中文名稱是1-脫氧野尻霉素。1-脫氧野尻霉素是一種含N的多羥基哌啶生物堿，化學(xué)名稱為3,4,5-三羥基-2-羥甲基四氫吡啶，分子式為C₆H₁₃NO₄，相對(duì)分子質(zhì)量為163，在桑屬植物尤其桑葉中含量較高。

大量研究證實(shí)，DNJ能有效抑制小腸黏膜上各種α-葡萄糖苷酶活性，調(diào)節(jié)肝臟葡萄糖代謝及限速酶表達(dá)，改善糖異生作用，顯著降低血糖水平。DNJ及其衍生物在糖代謝過(guò)程中與糖基中間體產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，能夠有效抑制α-糖苷酶的活性，在糖尿病、抗腫瘤及病毒感染等疾病方面有明顯的藥理作用。

同時(shí)，桑葉DNJ提取物能夠影響脂質(zhì)代謝酶(脂肪酸合成酶、蘋果酸酶、酰基輔酶A)活性，抑制腸道內(nèi)膽固醇吸收，從而降低血脂。

因此，近年來(lái)，有關(guān)DNJ方面的研究越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視。

目前，桑葉DNJ的提取方法主要有水或酸水提取法、有機(jī)溶劑提取法、微波/超聲波輔助提取法。

1.1、水或酸水提取法。桑葉DNJ具有較強(qiáng)的水溶性，傳統(tǒng)水提取法只能提取游離DNJ，對(duì)于結(jié)合性DNJ效果欠佳。水提取法是將桑葉進(jìn)行多次水蒸煮浸提。水提法雜質(zhì)多，濃縮過(guò)濾、蒸發(fā)困難，提取率低。DNJ屬于生物堿類化合物，易溶于酸性介質(zhì)，且熱酸液可軟化植物細(xì)胞壁，利于DNJ提取，故酸提法得率明顯高于水提法。然而，無(wú)論是水提取法還是酸水提取法，工藝步驟復(fù)雜，而且能耗大、效率低下。

1.2、有機(jī)溶劑提取法。生物堿及其鹽類均能溶于乙醇、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑，其中乙醇溶解性能好，對(duì)植物細(xì)胞壁穿透力強(qiáng)，能加速桑葉生物堿浸出，一般采用稀乙醇或酸性乙醇作提取溶劑。用乙醇浸泡后浸提樣品，DNJ提取率能夠達(dá)到95％，純度也大大提高。該方法提取液不易發(fā)霉變質(zhì)，且乙醇毒性小，可回收后反復(fù)利用，但是缺點(diǎn)是有機(jī)溶劑易燃易爆，采用有機(jī)溶劑有一定的危害性，存在著安全隱患，且不利于環(huán)保。

1.3、微波/超聲波輔助提取法。微波/超聲波輔助提取法具有快速簡(jiǎn)便、得率高、有效成分破壞少等優(yōu)點(diǎn)，在提取天然活性成分方面應(yīng)用前景較好。該方法利用微波促使介質(zhì)轉(zhuǎn)動(dòng)能力躍遷，加劇熱運(yùn)動(dòng)，超聲波產(chǎn)生空化、機(jī)械擾動(dòng)等物理作用使植物細(xì)胞壁破碎，再配合適當(dāng)萃取劑，加速DNJ浸出，從而提高得率。然而，基于微波和超聲波的應(yīng)用限制，只能結(jié)合溫水來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)DNJ的浸提，雖然能夠提高浸提效率，但是浸提的得率卻不高，難以做到大規(guī)模、批量化的DNJ提取生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于以上現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供一種蛋白桑生產(chǎn)提取的DNJ的制備方法，該方法能夠在超聲波提取的基礎(chǔ)上，快速、有效地提高桑葉中DNJ的得率，從而提高DNJ的提取效率。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種蛋白桑生產(chǎn)提取的DNJ的制備方法，該方法能夠?qū)崿F(xiàn)大規(guī)模、批量化的DNJ提取生產(chǎn)。

發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)：DNJ為堿性生物堿，能與稀酸結(jié)合生成鹽，有利于DNJ溶出，而超聲波產(chǎn)生空化、機(jī)械擾動(dòng)等物理作用使植物細(xì)胞壁破碎，故將超聲波與酸法結(jié)合可提高DNJ提取率。

基于此，本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：