[發明專利]CPP-scFv融合蛋白及相應的核酸分子、載體、細胞和藥物

有效

• 申請號: 202011156145.2
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN114478793B
• 公開（公告）日: 2023-09-19
• 發明（設計）人: 請求不公布姓名
• 申請（專利權）人: 廣州奈米微晶生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/395;A61K47/64;A61P35/00;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市精英專利事務所 44242
• 代理人: 李瑩

本發明提供了一種CPP?scFv融合蛋白及相應的核酸分子、載體、細胞和藥物，所述CPP?scFv融合蛋白為由CPP的C端通過接頭或以直接連接的方式與scFv的N端連接而成的重組蛋白BP16?scFv、重組蛋白S413?scFv、重組蛋白MAP?scFv中的一種或幾種；所述的CPP為BP16、S413、MAP中的一種。在不影響scFv活性的前提下，將穿膜肽與曲妥珠單抗的單鏈抗體偶聯，發揮了穿膜肽的穿膜特性，增強抗體的內吞效果，與胞內靶標結合，增強抗體藥物的抗腫瘤活性。CPP?scFv融合蛋白與scFv抗體具有同等的親和力，但對HER2+乳腺癌的細胞毒性更強，誘導HER2+乳腺癌細胞凋亡能力更強，同時對HER2陰性乳腺癌細胞的生長無影響，減少不良反應，可以用于HER2+乳腺癌的治療，為HER2+乳腺癌ADC藥物的研究提供了新的突破口。

技術領域

本發明涉及生物技術領域和醫學領域，尤其是指CPP-scFv融合蛋白及相應的核酸分子、載體、細胞和藥物。

背景技術

乳腺癌是女性中最常見的惡性癌癥類型，致死率在女性癌癥中排名第二，僅2018年，新發病例達到210萬，占女性癌癥患者的24.2％。乳腺癌分為三類，激素陽性(雌激素陽性或孕激素陽性)、人表皮生長因子受體2陽性(human?epidermal?growthfactorreceptor-2，HER2+)和三陰性乳腺癌，其中HER2+乳腺癌患者約占總患者的25％，具有復發率高、預后差等特點。常規的腫瘤治療手段主要包括手術、化療、放療等。手術切除和化療通常產生較大的傷害。而傳統化療使用的藥物通常是一些細胞毒分子如鉑類藥物、烷化劑及紫杉醇類等，因缺乏靶向性，進入體內具有全身毒性，出現對正常細胞的殺傷。曲妥珠單抗是1998年由FDA批準的靶向HER2+的單克隆抗體，它的應用顯著改善了早期HER2+乳腺癌患者的預后，是目前治療該類乳腺癌的一線靶向藥物。然而曲妥珠單抗單藥治療HER2+晚期乳腺癌有效率僅為20％-30％，聯合化療治療的有效率最高僅60％。由于內吞能力的不足，產生一定的耐藥性和心臟毒性等一系列不良反應，導致至少70％的HER2+乳腺癌患者出現了疾病進展。因此如何能夠提高靶向藥物的內吞能力，已成為開發新的HER2+藥物的方向。

細胞穿膜肽(Cell?penetrating?peptides，CPPs)是一類可以穿透生物膜并將各種外源物質遞送到細胞內的短肽，如siRNA，核酸，小分子治療劑，蛋白質等。這種有效的轉運系統不受細胞類型的影響且具有較低的細胞毒性。根據其理化性質可以分為陽離子穿膜肽、兩親性穿膜肽和疏水性穿膜肽三類。用穿膜肽增加抗體藥物的體內遞送是解決抗體藥物耐藥性，增加抗體藥物效果的優選方案。單鏈抗體(single?chain?antibody，scFv)相對于全抗體積小，具有良好的組織滲透能力，能在血液中快速清除，因此近年來在抗胞內抗原領域得到廣泛的應用。

但是，不同的CPP和scFv偶聯，會影響到CPP的效果，甚至會影響到scFv的活性。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：在不影響scFv靶向活性的前提下，提高曲妥珠scFv進入細胞的能力，提高單個細胞的載藥量，提升實際治療時曲妥珠scFv抑制HER2+腫瘤細胞的生長的治療效果。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

一種CPP-scFv融合蛋白，為由CPP的C端通過接頭或以直接連接的方式與scFv的N端連接而成的重組蛋白BP16-scFv、重組蛋白S413-scFv、重組蛋白MAP-scFv中的一種或幾種；所述的CPP為BP16、S413、MAP中的一種。

進一步地，所述BP16從天蠶素-蜂毒素雜種庫中篩選，所述S413由衍生自線性聚陽離子肽皮膚肽素的穿膜序列和衍生自SV40-T抗原的核定位序列嵌合組成，所述MAP為兩親性穿膜肽，所述接頭的氨基酸序列長度為2-50個氨基酸。