[發明專利]一種家蠅衍生抗菌肽D-26M及制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011155731.5
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112480223B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 孔德龍
• 申請（專利權）人: 徐州醫科大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/04;C07K1/06;C07K1/16;C07K1/14;A61K38/17;A61P31/04;A61P29/00
• 代理公司: 北京淮海知識產權代理事務所(普通合伙) 32205
• 代理人: 李妮

本發明公開了一種家蠅衍生抗菌肽D?26M及制備方法和應用，對家蠅抗真菌肽MAF?1A進行氨基酸殘基替換和右旋改造獲得D?26M，其序列如序列表SEQ?IQ?No.2所示；使用多肽合成儀進行固相合成多肽，使用反向高效液相色譜進行純化，最后進行氨基酸分析及質譜鑒定。本發明在保證高抗菌活性的情況下，提高了D?26M的穩定性和細胞選擇性；D?26M具有更強的陽離子性、疏水性以及滲透到病原菌雙層膜的能力，具有廣譜的抗菌活性及高效抗炎活性，尤其是對多重耐藥性鮑曼不動桿菌，對在體內外環境中的游離態鮑曼不動桿菌及其形成的生物被膜均有很好的抗性，且能有效抑制革蘭陰性菌外膜LPS的活性。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種抗菌肽及制備方法和應用，特別涉及一種家蠅衍生抗菌肽D-26M及制備方法和應用。

背景技術

據2016年發表的《抗菌藥物評論》估計，目前全世界每年有70萬人死于耐抗生素病原體引起的感染，到2050年，如果不能找到減緩耐藥性出現的解決方案，每年將有1000萬人面臨生命危險。鮑曼不動桿菌在臨床標本中的分離率和耐藥率逐年上升，這已是導致醫院感染的主要條件致病菌；革蘭氏陰性菌感染過程中釋放的內毒素(LPS)持續刺激機體免疫系統，誘發病原菌感染引起的內毒素休克、敗血癥、泌尿系感染、院內獲得性肺炎等，尤其在重癥監護病房(intensive?care?unit，ICU)，致死率高達52％。另外，鮑曼不動桿菌能夠持續存在于外界環境中，該致病菌嚴重危害公共健康，使其成為人們亟待解決的問題。目前研究顯示，鮑曼不動桿菌對替加環素的耐藥率高達66％，對被認為是臨床治療耐藥性細菌感染最優手段的碳青霉烯類抗生素的耐藥率已達46～66％，而在所有接受多粘菌素治療鮑曼不動桿菌感染的患者中，約有一半患者出現急性腎損。因此，臨床上亟需對抗鮑曼不動桿菌感染的新型抗菌藥物，世界衛生組織也將針對鮑曼不動桿菌的新藥研發列為最優先級/關鍵性病原體。

抗菌肽(Antimicrobial?peptiDes，AMPs)是生物體抵抗外界病原體感染的小分子多肽。相較傳統抗生素，AMPs具有抗菌譜廣、抗菌機理獨特并且不易產生耐藥性的特性，具備新型抗菌藥物開發的巨大潛力，極有希望替代傳統抗生素用于臨床治療。但是，AMPs又存在穩定性差、活性低等缺點，從而限制了AMPs的臨床應用。因此，根據已知能夠影響AMPs生物活性的因素，進行AMPs分子改造及篩選高效衍生肽來克服AMPs的不足，這已成為肽類抗菌藥物開發的重要研究領域。影響AMPs生物學活性的重要因素有AMPs的氨基酸組成、肽鏈長度、凈電荷量、α-螺旋性等。家蠅(Musca?Domestica)是呈世界性分布的媒介昆蟲，由于孳生環境中病原微生物的結構和多樣性復雜，其以抗菌肽為效能分子的高效抗病能力受到廣泛關注。

發明內容

本發明的目的在于提供一種家蠅衍生抗菌肽D-26M，該衍生抗菌肽在保有AMPs高抗菌活性的同時，可提高其穩定性和細胞選擇性。

為實現上述目的，一種家蠅衍生抗菌肽D-26M，其序列如序列表SEQ?ID?No.2所示。

優選的，所述抗菌肽D-26M具有α-螺旋結構。

本發明的另一目的在于提供一種家蠅衍生抗菌肽D-26M的制備方法，該制備方法成本低，所制備得到的衍生抗菌肽D-26M可具有更強的陽離子性、疏水性以及滲透到病原菌雙層膜的能力。

為實現上述目的，一種家蠅衍生抗菌肽D-26M的制備方法，具體方法步驟如下：

(1)采用氨基酸殘基替換法對多肽MAF-1A進行氨基酸序列突變并右旋改造，多肽MAF-1A的序列如序列表SEQ?IQ?No.1所示；具體過程為：用右旋Lys替換多肽MAF-1A氨基酸序列中的Glu和Asp；用右旋Leu替換多肽MAF-1A氨基酸序列中的Gln和第23位的Lys；用含有吲哚側鏈的右旋Trp替代新肽MAF-1A氨基酸序列中的第9和第15位的Lys；對多肽MAF-1A中的余下氨基酸均采用相應的右旋氨基酸進行替換；獲得長度為26的衍生抗菌肽D-26M，其序列如序列表SEQ?IQ?No.2所示；