[發明專利]一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法

有效

• 申請號: 202011154994.4
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112251484B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發明（設計）人: 張新悅;蔣曉曉;尹韋蔚;高鵬;王峰
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

（1）蛋白酶催化合成甘氨酸寡肽；

（2）脂肪酶催化甘氨酸寡肽接枝聚乙二醇制備得到甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物，包括如下步驟：

在無水三氯乙烷中加入步驟（1）制備得到的甘氨酸寡肽、聚乙二醇單甲醚和脂肪酶，于絕對壓力0~101.325 KPa和30~50℃下反應10~24 h；反應結束后，將反應混合物在-4~0℃靜置8~20 h，減壓抽濾，將濾液干燥，再加入預熱后的丙酮攪拌直至全部溶解，將所得溶液在-4~0℃靜置8~20 h，減壓抽濾，所得沉淀即為甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物，

所述脂肪酶為爪哇毛霉菌脂肪酶M、黑曲霉脂肪酶A、米曲霉脂肪酶、疏綿狀嗜熱絲孢菌脂肪酶中的任一種。

2.根據權利要求1所述的一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述蛋白酶催化合成甘氨酸寡肽的方法包括：在磷酸緩沖液中加入L-甘氨酸甲酯鹽酸鹽、二甲亞砜和蛋白酶，在30～70℃下反應5～10小時；反應結束后，離心取沉淀，洗滌，冷凍干燥后得到甘氨酸寡肽。

3.根據權利要求2所述的一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法，其特征在于，所述蛋白酶包括菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶中的任一種，所述蛋白酶的添加量為1~10 U/g L-甘氨酸甲酯鹽酸鹽。

4.根據權利要求2所述的一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法，其特征在于，所述磷酸緩沖液為0.1~0.2M的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，磷酸緩沖液的pH值為5.5~8.0，所述二甲亞砜的體積為2.5～25%的磷酸緩沖液。

5.根據權利要求1~4任一所述的一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法，其特征在于，所述甘氨酸寡肽和聚乙二醇單甲醚與無水三氯乙烷的質量g體積mL為1:1.2~3，其中，甘氨酸寡肽、聚乙二醇單甲醚的重量比為1:1.2～1:5。

6.根據權利要求5所述的一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法，其特征在于，所述聚乙二醇單甲醚的平均分子量為200、400或1000 Da。

7.根據權利要求5所述的一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法，其特征在于，脂肪酶的添加量為1~10 U/g底物，所述底物為甘氨酸寡肽和聚乙二醇單甲醚。

8.根據權利要求6所述的一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法，其特征在于，脂肪酶的添加量為1~10 U/g底物，所述底物為甘氨酸寡肽和聚乙二醇單甲醚。

9.權利要求1~8任一所述的一種脂肪酶催化制備甘氨酸寡肽-聚乙二醇共聚物的方法在生物、醫藥和天然高分子材料領域的應用。