[發(fā)明專利]MRKH綜合征診斷標(biāo)記物及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011154575.0
• 申請(qǐng)日: 2020-10-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112322717B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱蘭;馬聰聰;陳娜;吳南;趙森
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/12;C12N15/11
• 代理公司: 浙江永鼎律師事務(wù)所 33233
• 代理人: 方惠琴

本發(fā)明公開(kāi)了一種MRKH綜合征診斷標(biāo)記物及其應(yīng)用，該MRKH綜合征診斷標(biāo)記物為cDNA序列中存在突變位點(diǎn)c.839+5GA的TBX6基因片段。專利權(quán)人通過(guò)對(duì)442名MRKH受試患者進(jìn)行外顯子組測(cè)序，首次在TBX6基因上發(fā)現(xiàn)了該突變位點(diǎn)，經(jīng)驗(yàn)證，該突變位點(diǎn)所在的六號(hào)內(nèi)含子產(chǎn)生了新的剪接位點(diǎn)，導(dǎo)致TBX6基因上六號(hào)內(nèi)含子前96bp堿基滯留在mRNA中，進(jìn)而導(dǎo)致基因產(chǎn)物失去功能而引發(fā)MRKH。因此，通過(guò)采集受檢者外周血，提取基因組DNA，而后采用MRKH綜合征診斷試劑盒檢測(cè)TBX6基因上是否存在該突變位點(diǎn)，即可輔助MRKH綜合征的快速診斷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種MRKH綜合征診斷標(biāo)記物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

女性胚胎期苗勒管發(fā)育異常，導(dǎo)致先天性無(wú)陰道合并無(wú)子宮或僅有始基子宮，即MRKH綜合征(Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome)，發(fā)病率為1/5000-1/4000。主要臨床特征包括：無(wú)子宮或?qū)嵭允蓟訉m結(jié)節(jié)，極少部分患者雖有功能性子宮內(nèi)膜但子宮發(fā)育不良；陰道完全缺失，或陰道上2/3缺失、下1/3呈穴狀，其頂端為盲端；輸卵管、卵巢發(fā)育正常，第二性征為正常女性，染色體核型為女性核型46，XX。MRKH綜合征主要分為兩種類型，其中Ⅰ型(單純型)表現(xiàn)為單純子宮、陰道發(fā)育異常，而泌尿系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)發(fā)育正常，此型最為常見(jiàn)；Ⅱ型(復(fù)雜型)表現(xiàn)為除子宮、陰道發(fā)育異常外，還伴有泌尿、骨骼系統(tǒng)或其他系統(tǒng)發(fā)育異常。

MRKH綜合征的患者女性第二性征發(fā)育正常，多因青春期原發(fā)性閉經(jīng)就診發(fā)現(xiàn)，少數(shù)患者以婚后性生活困難或周期性下腹痛為主訴癥狀。因患者青春期后無(wú)月經(jīng)來(lái)潮、無(wú)法正常性生活、不具生育能力，僅可成年后通過(guò)人工陰道成型術(shù)解決性生活的困難，對(duì)患者身心影響巨大。

應(yīng)用微陣列、比較基因組雜交(array-CGH)、DNA測(cè)序等技術(shù)已檢測(cè)出某些染色體畸變(chromosomal aberration)、基因突變等可能是MRKH綜合征的致病因素。研究者通過(guò)檢測(cè)染色體畸變位點(diǎn)來(lái)篩選相關(guān)的基因，并判別相關(guān)基因在MRKH綜合征中的致病性。既往文獻(xiàn)報(bào)道，染色體16p11.2區(qū)域的片段缺失在約2％的MRKH綜合征患者中發(fā)現(xiàn)，是MRKH綜合征最常見(jiàn)的染色體畸變之一，而定位于該區(qū)域的TBX6基因被認(rèn)為是可能性較大的可疑致病基因。Sandakan等在MRKH綜合征患者中發(fā)現(xiàn)TBX6基因的剪切位點(diǎn)突變(622-2AT)，該突變位于五號(hào)外顯子的剪接受體位點(diǎn)，因此該突變很可能降低了五號(hào)外顯子的正確剪接；Tewes等人在167名MRKH患者中發(fā)現(xiàn)5例攜帶TBX6基因的錯(cuò)義突變；Tbx6基因敲除的雌性小鼠中也表現(xiàn)出泌尿生殖系統(tǒng)畸形。

因此研究人員猜想TBX6基因突變可能是MRKH綜合征的致病原因之一，在早期對(duì)基因突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)能夠?qū)崿F(xiàn)盡早、盡快確診。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種MRKH綜合征診斷標(biāo)記物及其應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

MRKH綜合征診斷標(biāo)記物，該MRKH綜合征診斷標(biāo)記物為cDNA序列中存在突變位點(diǎn)c.839+5GA的TBX6基因片段。

本發(fā)明通過(guò)對(duì)442名MRKH受試患者進(jìn)行外顯子組測(cè)序，首次在TBX6基因上發(fā)現(xiàn)了該突變位點(diǎn)c.839+5GA，該突變位點(diǎn)經(jīng)Sanger測(cè)序確認(rèn)為真性突變；經(jīng)驗(yàn)證，該突變位點(diǎn)c.839+5GA所在的六號(hào)內(nèi)含子產(chǎn)生了新的剪接位點(diǎn)，導(dǎo)致TBX6基因上六號(hào)內(nèi)含子前96bp堿基滯留在mRNA中，進(jìn)而導(dǎo)致TBX6基因產(chǎn)物失去功能而引發(fā)MRKH。

基于此，本發(fā)明提供了上述的MRKH綜合征診斷標(biāo)記物在制備MRKH綜合征診斷試劑盒中的應(yīng)用。

同時(shí)，本發(fā)明還提供了一種MRKH綜合征診斷試劑盒，該MRKH綜合征診斷試劑盒中至少包含用于擴(kuò)增上述的MRKH綜合征診斷標(biāo)記物的PCR擴(kuò)增引物。