[發明專利]一種有效抑制錦竹組培過程中叢芽褐化的方法

有效

• 申請號: 202011154569.5
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112154917B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 林樹燕;王星;徐薪璐;卞麗麗;周必鐃;丁雨龍
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274
• 代理人: 蘇秋麗;邱興天

本發明公開了一種有效抑制錦竹組培過程中叢芽褐化的方法，屬于植物組織培養技術領域。該方法包括：選擇錦竹外植體、消毒滅菌、初代誘導培養、繼代增殖培養和防褐化培養等步驟。本發明針對現有錦竹組培中叢芽褐化嚴重的問題，通過添加抗褐化劑、調整培養基成分和激素配比手段，有效抑制了酚類物質氧化，避免了錦竹叢芽褐化現象的發生，可將錦竹叢芽褐化率降低到5％以下，解決了錦竹組培過程中叢芽褐化率高、容易死亡的難題，表現出較好的技術優勢，也為提高錦竹快速繁殖效率奠定了良好技術基礎。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種有效抑制錦竹組培過程中叢芽褐化的方法。

背景技術

錦竹(Hibanobambus tranguillans f.shiroshima)又名白紋陰陽竹，隸屬于陰陽竹屬，混生竹種。竹高1.5-2m，徑0.8-1.4cm，初植幾年竹叢較矮，葉片披針形至闊披針形，長9-25cm，寬1.3-5cm。筍期4月下旬，新葉黃白色，漸綠間有較寬的黃白色條紋，葉色亮麗，在我國被列為珍稀彩葉觀賞地被竹種(史軍義,易同培,馬麗莎,王海濤,楊林.我國的彩色竹資源及其保護利用，四川林業科技2016,27(3)：42-48)。

竹類植物枝繁葉茂、四季常青，在涵養水源、保持水土、防風固沙、調節氣候、凈化空氣和減少噪音等方面意義重大。同時竹子經冬不凋，形態獨特，風姿秀雅，具有很高的觀賞價值，是一類重要的園林觀賞植物。近年來，全球對生存環境質量問題的關注、城市化進程的快速推進和人們生活水平的不斷提高，竹類植物的生態和環境景觀功能日益受到人們的重視。隨著觀賞竹受到的關注越來越多，傳統的繁殖方法如移竹、竹蔸、埋鞭、埋稈、埋節等具有消耗母竹多、種苗運輸不便、勞動強度大、繁殖系數低等缺點，難以滿足當前商業化生產的要求。針對這一現象，植物組織培養技術開始運用到觀賞竹的生產中來，目前對錦竹組培研究已有報道(曾余力,王旭鋒,林新春,桂仁意,張翠萍,黃麗春.白紋陰陽竹試管快繁技術研究，西南林學院學報,2010,30(3)：38-41)，但錦竹在快繁過程中叢芽易出現褐化現象，外植體容易受到褐化而死亡，嚴重阻礙快繁體系的建立。

外植體發生褐變是植物組織培養中的三大難題之一，也是影響組培能否成功的重要因素。有研究表明，導致褐化的主要原因是由多酚氧化酶作用于天然底物酚類物質形成醌而引起的，通過加入抗氧化劑、吸附劑以及調整滲透壓可較好地控制褐化現象發生。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明要解決的技術問題在于提供一種有效抑制錦竹組培過程中叢芽褐化的方法，通過在培養基中添加抗褐化劑和調整蔗糖濃度，從而減輕錦竹組培苗褐化現象的發生，有效提高錦竹叢芽的抗褐化能力，在較短時間內獲得大量健康的錦竹叢芽，為錦竹快繁體系的建立奠定基礎。

為了解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：

一種有效抑制錦竹組培過程中叢芽褐化的方法，包括以下步驟：

(1)外植體的選取：于夏季6-8月，選取錦竹當年生健康、無病害的半木質化帶芽枝條，經預處理后備用；

(2)消毒滅菌：用次氯酸鈉溶液及酒精對預處理后的外植體進行消毒滅菌，得到無菌錦竹外植體；

(3)初代誘導培養：將無菌錦竹外植體接種到誘導培養基上進行叢芽誘導，得到無菌芽；其中，誘導培養基為MS+4mg/L 6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)+0.5mg/L KT(激動素)+0.5mg/LTDZ(噻二唑苯基脲)；

(4)繼代增殖培養：在初代培養中獲得健康無菌苗后，將其剪成3-5個芽為一叢，移至不定芽增殖培養基中進行繼代增殖培養30d；所述增殖培養基為MS+5mg/L6-BA+0.2mg/LKT，增殖培養基中添加抗褐化劑或蔗糖；所述抗褐化劑為PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、L-谷氨酰胺或活性炭，調整蔗糖濃度以改變培養基中滲透壓。