[發(fā)明專利]一種降低河沙中植物重金屬鉛鎘的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011154111.X
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112094786A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李璟;許向?qū)?/a>;雷濘菲;李亞軍;楊蕤蘭;魏謝璐瑤;劉泊鈺
• 申請（專利權(quán)）人: 四川省地質(zhì)礦產(chǎn)勘查開發(fā)局四0五地質(zhì)隊(duì);成都理工大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;A01N63/20;A01N59/26;A01P21/00;C12R1/01
• 代理公司: 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51241
• 代理人: 宋紅賓

1.一種降低河沙中植物重金屬鉛鎘的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)、菌種富集：取5g磷礦粉，加入到100mL滅菌后的LB液體培養(yǎng)基中，28℃、160r/min培養(yǎng)2d，得到富集菌液；

(2)、菌種篩選：采用滅菌溶磷固體培養(yǎng)基；將富集菌液用無菌水稀釋，選取10^-3、10^-5、10^-7稀釋后的菌液各150μL涂布于平板上，將平板于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d，觀察并記錄菌落生長情況及透明圈大小；5d后挑取透明圈較大的菌落劃線于新的平板上，28℃培養(yǎng)5d，重復(fù)操作純化3次，挑取單菌落用LB液體培養(yǎng)基活化16h，甘油保存于-80℃；

(3)菌種馴化：先采用滅菌溶磷液體培養(yǎng)基；將配好的Pb(NO₃)₂、Cd(NO₃)₂溶液用0.22μm無菌濾膜過濾后加入到溶磷液體培養(yǎng)基中，調(diào)整出不同Pb²⁺、Cd²⁺濃度的培養(yǎng)基；

取1mL活化后的菌液加入到100mL含有Pb²⁺、Cd²⁺濃度最低的培養(yǎng)基中，于28℃、160r/min搖床培養(yǎng)馴化7d；

取1mL菌液轉(zhuǎn)移至100mL含有Pb²⁺、Cd²⁺濃度高一級的培養(yǎng)基中，于28℃、160r/min搖床培養(yǎng)馴化7d；

如此重復(fù)操作多次進(jìn)行馴化，每次培養(yǎng)時的Pb²⁺、Cd²⁺濃度遞增；

馴化結(jié)束后取1mL菌液加入到滅菌后的LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行活化；

(4)擴(kuò)大培養(yǎng)：按溶磷液體培養(yǎng)基配方稱取各組分后，使用超純水定容至1L，待藥品充分溶解后，轉(zhuǎn)移到300mL錐形瓶中，封口膜封口，滅菌，冷卻后備用；取馴化后的菌種用LB液體培養(yǎng)基活化14h，然后用無菌水洗滌3次，每300mL的LB液體培養(yǎng)基中加入3mL無菌水洗滌后的菌液，培養(yǎng)48h待用；

(5)取磷礦粉和解磷菌體按照質(zhì)量比1～4:1混合作為復(fù)合菌劑，復(fù)合菌劑以河沙質(zhì)量0.5％的用量添加并混勻。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低河沙中植物重金屬鉛鎘的方法，其特征在于，步驟(5)所述的復(fù)合菌劑中還加入腐殖酸，取磷礦粉、解磷菌體和腐殖酸按照質(zhì)量比1～4:1:0.5～1混合。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低河沙中植物重金屬鉛鎘的方法，其特征在于，所述的LB液體培養(yǎng)基，由以下原料按照比例制成：NaCl 10.0g、酵母粉5.0g、胰蛋白胨10.0g、蒸餾水1L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低河沙中植物重金屬鉛鎘的方法，其特征在于，所述的溶磷固體培養(yǎng)基，由以下原料按照比例制成：葡萄糖10.0g、(NH₄)₂SO₄ 2g、酵母粉0.5g、NaCl0.3g、KCl 0.3g、FeSO₄·7H2O 0.03g、MgSO₄·7H₂O 0.3g、MnSO₄·4H₂O 0.03g、Ca₃(PO₄)₂ 5g、蒸餾水1L、瓊脂粉20.0g。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低河沙中植物重金屬鉛鎘的方法，其特征在于，所述的溶磷液體培養(yǎng)基，由以下原料按照比例制成：葡萄糖10.0g、(NH₄)₂SO₄ 2g、酵母粉0.5g、NaCl0.3g、KCl 0.3g、FeSO₄·7H2O 0.03g、MgSO₄·7H2O 0.3g、MnSO₄·4H₂O 0.03g、Ca₃(PO₄)25g，蒸餾水定容至1L。