[發(fā)明專利]一種高效二聯(lián)檢測兔瘟和兔瘟2型的引物以及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011154052.6
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112280898A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧先東;陳斌;周明忠;陳弟詩;劉艷紅;乙叢敏
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波愛基因科技有限公司;四川省動物疫病預(yù)防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 寧波甬致專利代理有限公司 33228
• 代理人: 李迎春

本發(fā)明公開一種高效二聯(lián)檢測兔瘟和兔瘟2型的引物以及試劑盒，本發(fā)明以改良后的LAMP技術(shù)為基因擴(kuò)增反應(yīng)原理，在反應(yīng)體系里加入金納米顆粒，吸附ssDNA和蛋白酶，抑制升溫過程中的非特異性反應(yīng)，達(dá)到熱啟動的目的，避免在升溫過程中的非特異性反應(yīng)；結(jié)合改良后的LAMP技術(shù)與微流控芯片技術(shù)，既可以快速、準(zhǔn)確的檢測區(qū)分兔瘟與兔瘟2型，同時，反應(yīng)試劑預(yù)埋于微流控芯片上，實現(xiàn)一樣雙指標(biāo)檢測，又使用戶操作簡便。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效二聯(lián)檢測兔瘟和兔瘟2型的引物以及試劑盒。

背景技術(shù)

兔病毒性出血癥(rabbit hemorrhagic disease，RHD)，俗稱兔瘟，是由兔出血癥病毒(rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV)引起的兔的一種急性、高度致死性傳染病。RHD以呼吸系統(tǒng)出血，實質(zhì)器官淤血、腫大、出血和肝臟壞死為主要病變特征，主要危害2月齡以上的養(yǎng)殖和野生的多個穴兔品種，死亡率達(dá)80%-100%。2010年在法國出現(xiàn)了由RHDV新種即兔出血癥病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus 2，RHDV2)引起的能感染致死30日齡以內(nèi)的兔子和傳統(tǒng)RHDV毒株滅活苗的免疫過的兔子的新型兔病毒性出血癥(newrabbit hemorrhagic disease，nRHD)，也稱為兔病毒性出血癥2型(rabbit hemorrhagicdisease type 2，RHD2)。目前的診斷方法是RT-PCR法。采用現(xiàn)有的PCR技術(shù)，由于其反應(yīng)要在2個不同的溫度區(qū)循環(huán)，對儀器要求高，成本也相對高昂，并且PCR技術(shù)僅僅1對擴(kuò)增引物，易受干擾，特異性相對不足，且出結(jié)果時間較久，操作專業(yè)要求高，微量加量步驟多。而LAMP技術(shù)共有4條不同的特異性引物，故而檢測結(jié)果準(zhǔn)確度更高，但是由于是恒溫反應(yīng)，缺少類似PCR的熱啟動酶，在設(shè)備升溫階段容易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增從而影響檢測結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷提供一種高效二聯(lián)檢測兔瘟和兔瘟2型的引物及試劑盒。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種高效二聯(lián)檢測兔瘟和兔瘟2型的引物，具體為：

RHDV-F3：CCGGCACAAACCAAAAYC；

RHDV-B3：GTGCGCCTGACRACAGAC；

RHDV-FIP：ATGTGACGGCAYTGGCGTTT-CCGGACTGTTTGTGATGGC；

RHDV-BIP：

TTGTRACTACACCCGGCACTCC-GCGAACATGATGGGTGTGTT；

RHDV2-F3：GCTTCCGGCTTCATGGAAC；

RHDV2-B3：GAAAAGCCATTGGTTGTGCC；

RHDV2-FIP：

TCRATGAGGGTGGCTGAAGCC-TTGGCTTGAGTGTTGATGGA；

RHDV2-BIP：

AGAVCTTGTTGACATCCGCCC-ARTTGTACACRAGCGTRCT。

本發(fā)明還提供一種高效二聯(lián)檢測兔瘟和兔瘟2型的試劑盒，所述試劑盒包括上述引物以及反應(yīng)液，所述反應(yīng)液的組成為：

20 mM Tris-HCl 0.2 μL

40 mM KCl 6.8 μL