[發(fā)明專利]茶樹AMP脫氨酶基因SSR分子標記引物及應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011148432.9
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN114480696A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設計）人: 彭靖茹;張芬;馮春梅;黃壽輝;甘志勇;溫立香;陳家獻;袁冬寅;檀業(yè)維;李建強;黎新榮
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區(qū)亞熱帶作物研究所(廣西亞熱帶農(nóng)產(chǎn)品加工研究所)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6811;C12N15/11
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產(chǎn)權代理有限公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.茶樹AMP脫氨酶基因SSR分子標記，其特征在于分別具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.4的堿基序列，標記編號為SSR1-AMP、SSR6-AMP、SSR8-AMP、SSR9-AMP。

2.擴增權利要求1所述茶樹AMP脫氨酶基因SSR分子標記的引物，其特征在于分子標記SSR1-AMP、SSR6-AMP、SSR8-AMP、SSR9-AMP的引物分別包括具有序列表SEQ.ID.No.5和SEQ.ID.No.6、SEQ.ID.No.7和SEQ.ID.No.8、SEQ.ID.No.9和SEQ.ID.No.10、SEQ.ID.No.11和SEQ.ID.No.12的堿基序列。

3.權利要求1所述SSR分子標記的制備方法，其特征在于：利用特定引物對茶樹總DNA進行PCR擴增，得到簡單重復序列；所述引物包括具有序列表SEQ.ID.No.5和SEQ.ID.No.6、SEQ.ID.No.7和SEQ.ID.No.8、SEQ.ID.No.9和SEQ.ID.No.10、SEQ.ID.No.11和SEQ.ID.No.12的堿基序列。

4.根據(jù)權利要求3所述的SSR分子標記的制備方法，其特征在于包括以下操作步驟：

1提取DNA

采用試劑盒提取茶樹的基因組DNA作為模板；

2PCR反應

反應體系：反應總體積為20μL，其中2×PCR Mix 10μL，茶樹DNA模板1μL，ddH₂O 8μL，正向引物和反向引物各1μL；

反應程序：94℃預變性5min，接著每個循環(huán)94℃高溫變性45s，55～60℃退火時間45s，72℃延伸45s，35個循環(huán)后，72℃延伸7min，4℃永久保存；

3電泳顯色

取5μL PCR產(chǎn)物在8％非變性聚丙烯酰胺凝膠上恒電壓200v電泳60min；電泳結束后，凝膠用硝酸銀進行染色顯影。

5.根據(jù)權利要求4所述的SSR分子標記的制備方法，其特征在于：所述正向引物為序列表SEQ.ID.No.5、SEQ.ID.No.7、SEQ.ID.No.9、SEQ.ID.No.11的引物，反向引物為序列表SEQ.ID.No.6、SEQ.ID.No.8、SEQ.ID.No.10、SEQ.ID.No.12的引物。

6.根據(jù)權利要求4所述的SSR分子標記的制備方法，其特征在于：所述茶樹DNA模板為1～50ng，所述正向引物或反向引物的濃度為10μmol/L。

7.權利要求1所述SSR分子標記在茶樹的植物種質(zhì)資源的鑒定、遺傳多樣性的研究、遺傳圖譜的構建、種子純度鑒定、種群的親緣關系及演化或遺傳育種方面的應用。

8.權利要求1所述SSR分子標記在茶樹咖啡堿的生物合成研究方面的應用。

9.權利要求2所述SSR分子標記的引物在茶樹的植物種質(zhì)資源的鑒定、遺傳多樣性的研究、遺傳圖譜的構建、種子純度鑒定、種群的親緣關系及演化或遺傳育種方面的應用。

10.權利要求2所述SSR分子標記的引物在茶樹咖啡堿的生物合成研究方面的應用。