[發明專利]茶樹S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因啟動子區SSR分子標記引物及應用

有效

• 申請號: 202011148419.3
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN114480695B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 彭靖茹;檀業維;甘志勇;溫立香;袁冬寅;呂麗蘭;陳家獻;張芬;黃壽輝;趙媛;王淋靚;任二芳;程三紅
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區亞熱帶作物研究所(廣西亞熱帶農產品加工研究所)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6811;C12N15/11
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.茶樹S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因SSR分子標記，其特征在于分別具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.2的堿基序列，標記編號為SSR1-SAMS、SSR2-SAMS。

2.擴增權利要求1所述茶樹S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因SSR分子標記的引物，其特征在于分子標記SSR1-SAMS、SSR2-SAMS的引物分別包括具有序列表SEQ.ID.No.3和SEQ.ID.No.4、SEQ.ID.No.5和SEQ.ID.No.6的堿基序列。

3.權利要求1所述SSR分子標記的制備方法，其特征在于：利用特定引物對茶樹總DNA進行PCR擴增，得到簡單重復序列；所述引物包括具有序列表SEQ.ID.No.3和SEQ.ID.No.4、SEQ.ID.No.5和SEQ.ID.No.6的堿基序列。

4.根據權利要求3所述的SSR分子標記的制備方法，其特征在于包括以下操作步驟：

1提取DNA

采用試劑盒提取茶樹的基因組DNA作為模板；

2PCR反應

反應體系：反應總體積為20μL，其中2×PCR Mix 10μL，茶樹DNA模板1μL，ddH₂O 8μL，正向引物和反向引物各1μL；

反應程序：94℃預變性5min，接著每個循環94℃高溫變性45s，55～60℃退火時間45s，72℃延伸45s，35個循環后，72℃延伸7min，4℃永久保存；

3電泳顯色

取5μL PCR產物在8％非變性聚丙烯酰胺凝膠上恒電壓200v電泳60min；電泳結束后，凝膠用硝酸銀進行染色顯影。

5.根據權利要求4所述的SSR分子標記的制備方法，其特征在于：所述正向引物為序列表SEQ.ID.No.3、SEQ.ID.No.5的引物，反向引物為序列表SEQ.ID.No.4、SEQ.ID.No.6的引物。

6.根據權利要求4所述的SSR分子標記的制備方法，其特征在于：所述茶樹DNA模板為1～50ng，所述正向引物或反向引物的濃度為10μmol/L。

7.權利要求1所述SSR分子標記在茶樹的植物種質資源的鑒定、遺傳多樣性的研究、遺傳圖譜的構建、種子純度鑒定、種群的親緣關系及演化或遺傳育種方面的應用。

8.權利要求1所述SSR分子標記在茶樹生物堿的生物合成研究方面的應用。

9.權利要求2所述SSR分子標記的引物在茶樹的植物種質資源的鑒定、遺傳多樣性的研究、遺傳圖譜的構建、種子純度鑒定、種群的親緣關系及演化或遺傳育種方面的應用。

10.權利要求2所述SSR分子標記的引物在茶樹生物堿的生物合成研究方面的應用。