[發(fā)明專利]一種室溫穩(wěn)定的單組分TMB顯色液及其制備方法

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• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN112415185A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周志鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 周瓊

本發(fā)明公開了一種室溫穩(wěn)定的單組分TMB顯色液，包括以下組分：聚乙烯醇0.001g/L?20g/L，阿拉伯糖0.16g/L?30g/L，檸檬酸1mM?100mM，乙二胺四乙酸二鈉1mM?20mM，30％過氧化氫水溶液1mM?10mM，TMB 1mM?3mM，DMSO 20ml/L?30ml/L，Proclin300 0.04％，磷酸氫二鈉1mM?25mM，超純水定容至1L。所述單組分TMB顯色液采用檸檬酸和磷酸氫二鈉緩沖液，且緩沖液的pH值為3.1?3.6。所述聚乙烯醇為1788低粘度型聚乙烯醇，且聚乙烯醇的聚合度為1700，醇解度為88％。一種室溫穩(wěn)定的單組分TMB顯色液的制備方法，包括以下步驟：步驟一：試劑母液配制：1.1：50g/L低粘度聚乙烯醇1788配制：準(zhǔn)確稱取5g 1788低粘度型聚乙烯醇于燒杯中，加入適量超純水，置于65℃恒溫水浴鍋中，通過玻璃棒持續(xù)攪拌使顆粒分散均勻，溶解后繼續(xù)保溫2小時，超純水定容至100ml，使用0.45μm濾膜過濾。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及TMB顯色液技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種室溫穩(wěn)定的單組分TMB顯色液及其制備方法。

背景技術(shù)

在酶聯(lián)免疫吸附測定試驗(ELISA)中，辣根過氧化物酶(HRP)催化過氧化物分解，釋放出氧氣，將顯色液底物氧化，溶液變藍。加入強酸后終止反應(yīng)，藍色溶液變黃，在450nm處有最大吸收峰，通過測量該吸光度值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線顯色情況，便可定量計算出被檢測物的含量。

常用的顯色液底物有鄰苯二胺(OPD)，2,2'-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)及3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯二胺(TMB)，研究表明，OPD有潛在的致癌性，而ABTS在顯色靈敏度上表現(xiàn)不佳，而TMB作為一種新型安全的色原試劑，以顯色高效、無毒、不致癌及穩(wěn)定性好等特點，成為ELISA檢測的主流顯色劑。

由于TMB易被空氣環(huán)境中氧氣及溶液中過氧化物氧化，所以TMB顯色液的生產(chǎn)受到一定限制；當(dāng)前市售的EILSA試劑盒所采用的TMB顯色液大多數(shù)為雙組分，分為A液和B液，這最大限度的減少了TMB與過氧化物的接觸，保證了顯色液的穩(wěn)定性，但該顯色液使用時需先預(yù)混合，給操作造成不便，同時混合液使用后丟棄，造成一定程度的浪費；市售的ELISA試劑盒也有采用單組分TMB顯色液的，但現(xiàn)有單組分TMB顯色液存在存儲時間短(冷藏于4℃)、顯色背景高等問題；在ELISA實際操作中，用戶容易忘記將使用后的TMB重新放回4℃存儲，導(dǎo)致TMB顯色液在室溫存儲過程中逐步失效。

綜上所述，需要一種室溫穩(wěn)定的單組分TMB顯色液及其制備方法來解決現(xiàn)有技術(shù)中所存在的不足之處。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種室溫穩(wěn)定的單組分TMB顯色液及其制備方法，旨在解決上述問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種室溫穩(wěn)定的單組分TMB顯色液，包括以下組分：聚乙烯醇0.001g/L-20g/L，阿拉伯糖0.16g/L-30g/L，檸檬酸1mM-100mM，乙二胺四乙酸二鈉1mM-20mM，30％過氧化氫水溶液1mM-10mM，TMB 1mM-3mM，DMSO 20ml/L-30ml/L，Proclin3000.04％，磷酸氫二鈉1mM-25mM，超純水定容至1L。

進一步的，所述單組分TMB顯色液采用檸檬酸和磷酸氫二鈉緩沖液，且緩沖液的pH值為3.1-3.6。

進一步的，所述聚乙烯醇為1788低粘度型聚乙烯醇，且聚乙烯醇的聚合度為1700，醇解度為88％。

一種室溫穩(wěn)定的單組分TMB顯色液的配制方法，包括以下步驟：

步驟一：試劑母液配制：

1.1：50g/L聚乙烯醇配制：準(zhǔn)確稱取5g聚乙烯醇于燒杯中，加入適量超純水，置于65℃恒溫水浴鍋中，通過玻璃棒持續(xù)攪拌使顆粒分散均勻，溶解后繼續(xù)保溫2小時，超純水定容至100ml，使用0.45μm濾膜過濾；