[發(fā)明專利]一種乳粉或乳清粉中唾液酸含量的檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011145588.1
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN114487255A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 武倫瑋;段國霞;唐爍;胡雪;劉麗君;李翠枝
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古伊利實業(yè)集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/96
• 分類號: G01N30/96;G01N30/06;G01N30/64
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務(wù)所 11313
• 代理人: 郗名悅;閆茂娟

本發(fā)明提供了一種乳粉或乳清粉中唾液酸含量的檢測方法，包括以下步驟：將乳粉或乳清粉溶解于水中，得到水溶液；向水溶液添加酸溶液，得到乳粉酸溶液或乳清粉酸溶液；對所述乳粉酸溶液或乳清粉酸溶液加熱進(jìn)行水解，得到乳粉水解液或乳清粉水解液；將乳粉水解液或乳清粉水解液進(jìn)行離心分離后，得到乳粉上清液或乳清粉上清液；將乳清粉上清液經(jīng)稀釋后過濾，得到乳清粉濾液；或者對乳粉上清液進(jìn)行固相萃取，用水淋洗，并用氯化鈉溶液洗脫收集得到乳粉洗脫液；將乳清粉濾液或乳粉洗脫液稀釋并過濾后獲得濾液；將濾液用高效陰離子交換色譜?電化學(xué)檢測器測定。本發(fā)明的方法操作簡單，能夠?qū)θ榍宸酆腿榉壑蠳?乙酰神經(jīng)氨酸進(jìn)行準(zhǔn)確定性和定量分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種乳粉或乳清粉中唾液酸殘留量的檢測方法。

背景技術(shù)

唾液酸(sialic acid，SA)是一族神經(jīng)氨酸(neuraminic acid)氮或氧基取代的衍生物，廣泛存在于多種生物組織，是構(gòu)成細(xì)胞膜上糖蛋白和糖脂的重要成分。在大部分哺乳動物組織中發(fā)現(xiàn)的唾液酸主要是N-乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Ac)，見式1，在狹義上講通常把N-乙酰神經(jīng)氨酸稱為唾液酸。唾液酸參與細(xì)胞表面多種生理功能，也是一種天然的大腦營養(yǎng)素，對嬰幼兒的免疫系統(tǒng)和認(rèn)知發(fā)育起到重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，牛乳中總唾液酸含量不到人乳唾液酸總量的25％，并且，人乳中存在大量的N-乙酰神經(jīng)氨酸，不含有N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(Neu5Gc)，見式2，而牛乳中含有占總唾液酸含量5％的N-羥乙酰神經(jīng)氨酸。因此，普通嬰幼兒配方粉與人乳相比，其所含的唾液酸種類與含量與人乳存在顯著差異。為貼近人乳這個金標(biāo)準(zhǔn)，廠商常把富含酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)的乳清粉作為配方粉的原料(其中酪蛋白糖巨肽是一種含有唾液酸的糖肽)，以此來強化奶粉中唾液酸含量，使嬰幼兒配方粉更加貼近母乳。

目前檢測乳制品中唾液酸的方法有很多，包括紫外分光光度法、液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和離子色譜法等。紫外分光光度法是最早用于唾液酸檢測的方法，其原理是利用酸水解釋放牛奶中的唾液酸，利用Cu²⁺和Cr³⁺協(xié)同催化唾液酸與間苯二酚顯色，用乙酸乙酯—正丁醇萃取有色物質(zhì)，在615nm波長處進(jìn)行測定。由于該方法存在步驟繁瑣、靈敏度低、檢測結(jié)果不穩(wěn)定等缺陷，因此很少應(yīng)用于乳制品這種的復(fù)雜基質(zhì)。高效液相色譜法檢測乳中唾液酸有許多不同方式，最典型的是采用高效液相色譜-熒光檢測器搭配4,5-亞甲二氧基-1,2-鄰苯二胺鹽(4,5-methylenedioxy-1,2-phenylenediamin edihydrochloride，DMB)衍生法。DMB衍生法可同時得到N-乙酰化神經(jīng)氨酸和O-乙酰化的神經(jīng)氨酸，雖然靈敏度較高，但操作比較繁瑣。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法雖然不需要唾液酸衍生過程，但該法儀器造價高，難以推廣。離子色譜法相比以上檢測手段具有靈敏度高、前處理無需衍生、儀器普及度高等優(yōu)點，且該法所用到的試劑對環(huán)境污染小，符合綠色化學(xué)的倡導(dǎo)。

法規(guī)方面，2017年5月國家計生委將N-乙酰神經(jīng)氨酸批準(zhǔn)為新食品原料。隨著中國配方制度的實施，產(chǎn)品中一個新原料的加入不但要符合添加劑的要求，還要做到保質(zhì)期內(nèi)的穩(wěn)定性驗證，并且要有能夠經(jīng)過驗證的檢驗方法來證實添加量符合標(biāo)示值的要求。然而，目前我國尚未頒布乳清粉和配方奶粉中唾液酸含量的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法。如何準(zhǔn)確、高效、安全地測定乳清粉和乳粉中唾液酸的含量成了近年來的一大難點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種快速、精準(zhǔn)檢測乳清粉和乳粉中的唾液酸含量的方法，通過對乳粉和乳清粉進(jìn)行不同的提取過程，能夠更好地進(jìn)行除雜凈化，節(jié)約處理步驟，從而使得提取的唾液酸純度更高，檢測效率更高。

根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供一種乳粉或乳清粉中唾液酸含量的檢測方法，包括以下步驟：

將乳粉或乳清粉溶解于水中，得到乳粉水溶液或乳清粉水溶液；

向所述乳粉水溶液或所述乳清粉水溶液添加酸溶液，得到乳粉酸溶液或乳清粉酸溶液；