[發明專利]適用于不同溫度的微生物原位培養芯片及其方法

有效

• 申請號: 202011145277.5
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN112210481B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 胡寶蘭;趙宇翔;蔣麗燕;翁沁;莊明錦;董璟;葉天強;鄭平
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;C12M1/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 傅朝棟;張法高

1.一種適用于不同溫度的微生物原位培養芯片，其特征在于，包括均為平板的第一固定板（1）、培養板（2）、接觸板（3）和第二固定板（4）；

所述第一固定板（1）上開設有貫通板體厚度方向的若干第一通孔（61），培養板（2）上開設有貫通板體厚度方向的若干第二通孔（62）；

所述接觸板（3）上開設有貫通板體厚度方向的接觸室（7）；接觸室（7）包括沿接觸板（3）厚度方向相互連通的第一腔室和第二腔室，第一腔室在接觸板（3）板面方向的垂直投影將第二腔室在接觸板（3）板面方向的垂直投影完全覆蓋；第二腔室為開設有貫通板體厚度方向若干第三通孔（63）的孔板；

所述第二固定板（4）的上板面固定有若干筒狀培養室（8），培養室（8）與第二固定板（4）的連接處封閉；培養室（8）的高度與所述接觸板（3）的厚度相同；

第一固定板（1）、培養板（2）、接觸板（3）和第二固定板（4）由上到下以可拆卸形式依次疊加，且所述第一固定板（1）和培養板（2）之間夾持有第一滲透膜（12），培養板（2）與接觸板（3）的第一腔室所在板面相連；培養室（8）穿過接觸板（3）上與其相對應的第三通孔（63）并與第二通孔（62）配合連接，第二通孔（62）和培養室（8）共同構成用于承裝固體培養基或液體培養基的連通的孔道；培養室（8）的頂部設有中空筒狀的防漏橡膠（9），第二通孔（62）和培養室（8）的結合處通過防漏橡膠（9）保持封閉；第一通孔（61）和第二通孔（62）的尺寸相同，且一一對應形成若干直通道；第一通孔（61）和第二通孔（62）之間通過第一滲透膜（12）密封，且第一滲透膜（12）為能使營養物質和生長因子通過但微生物不能通過的膜體；

所述第一滲透膜（12）為孔徑≤0.03?μm的半滲透膜；

所述接觸室（7）為多個。

2.根據權利要求1所述的微生物原位培養芯片，其特征在于，所述第一固定板（1）、培養板（2）、接觸板（3）和第二固定板（4）均為不銹鋼或聚丙烯樹脂材料。

3.根據權利要求1所述的微生物原位培養芯片，其特征在于，所述微生物原位培養芯片中的各層板體上均開設有貫通板面厚度方向且一一對應的固定孔（5），固定螺絲（11）穿過固定孔（5）并通過固定螺母（10）將各層板體連接固定。

4.一種基于權利要求1所述微生物原位培養芯片的微生物富集培養方法，具體如下：

首先對目標生境的樣品進行預處理，隨后通過梯度稀釋法使樣品溶液中的微生物濃度達到目標稀釋度，并將稀釋后的樣品溶液滴加至固體培養基或液體培養基中，得到培養基樣品；

在大于等于目標溫度的環境下，將培養基樣品加入并使其充滿所述培養室（8）的內腔，通過將每個培養室（8）穿過對應的第三通孔（63）使第二固定板（4）和接觸板（3）連接；接觸板（3）的上方依次貼合固定有培養板（2）、第一滲透膜（12）和第一固定板（1），同時，在培養室（8）的頂部布設防漏橡膠（9）以使培養板（2）和培養室（8）的結合處封閉，得到微生物原位培養芯片；

將所述微生物原位培養芯片置于目標生境中，目標生境中的環境介質進入微生物原位培養芯片的第一通孔（61）內部，使培養基樣品通過第一滲透膜（12）與環境介質中的營養物質進行交換，為培養基樣品中微生物的富集培養提供目標生境的生長環境，同時，避免培養基樣品與環境介質中的微生物進行交換。

5.根據權利要求4所述的微生物富集培養方法，其特征在于，所述微生物原位培養芯片在使用后經75％乙醇消毒處理，以用于下一次的微生物富集培養。