[發明專利]一種高清晰度術中冰凍切片的制作方法

在審

• 申請號: 202011143904.1
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN112362424A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 黎濟榮
• 申請（專利權）人: 黎濟榮
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N1/34;G01N1/42
• 代理公司: 重慶宏知億知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 50260
• 代理人: 梁山丹

本發明公開了一種高清晰度術中冰凍切片的制作方法，包括如下步驟：S1首先，避免組織溶解、組織污染、組織破壞等干擾因素；S2標本去除多余脂肪、毛發、線頭、鈣?；蚬撬槠捌渌参铮籗3取材時用紗布吸取標本表面水分，作簡單的物理脫水。取材刀鋒利無損能減少組織損傷，提高取材質量；S4為減少冰晶形成，應避免取材過厚過大及冰凍過慢過長，因水結晶時分為兩種結晶態，即玻璃態與晶體態，如腎臟組織質地嫩脆，冰凍過慢時間太長，切片易碎且組織細胞形態變形嚴重。本發明術中冰凍制片質量顯著提高，清晰度與標準石蠟切片比對差距較小，大幅度提高了術中冰凍切片的清晰度，提高了術中冰凍病理診斷的準確性和可靠性。

技術領域

本發明涉及病理術中冰凍切片技術領域，尤其涉及一種高清晰度術中冰凍切片的制作方法。

背景技術

新時代需要高清晰度術中冰凍病理切片。到目前為止國內大多數病理科的術中冰凍病理切片在展示組織結構及細胞特征上清晰度確實不高，常常因此對術中冰凍病理診斷造成較大的識別困擾和診斷風險。

各大醫院在術中冰凍染色技術流程上基本一致，但在一些關鍵細節上有差異，如蘇木素染色環節。有的病理科術中冰凍病理制片時此環節使用酒精燈加熱，常規石蠟制片時使用微波爐加熱；有的病理科為全自動術中冰凍染色機制片，此環節未加熱；有的病理科此環節使用恒溫箱加熱；有的病理科此環節使用電吹風加熱。為了切實比較上述制片效果的差異，筆者對不同術中冰凍染色流程的全部技術細節反復實驗測量，包括使用試劑的品種、濃度、作用時間、可能的作用機制等，并按蘇木素染色的不同干預方式各制備100張相關病理切片；結果顯示蘇木素染色環節使用微光波干預的一組術中冰凍染色制片效果最好，清晰度最高，展示的組織結構及細胞特征與標準石蠟制片效果接近，除部分含水量大的疏松組織因冰晶破壞致制片質量下降。

圍繞該發現，發明人對不同術中冰凍染色流程的操作步驟及技術細節做了全面系統的探索和試驗，并做了大量的文獻復習，然后以微光波技術為基礎，完善了高清晰度術中冰凍染色流程的技術模式。高清晰度術中冰凍染色流程受到常規石蠟制片流程的啟發，以術中冰凍病理制片的實驗條件，模擬了標準石蠟制片流程的核心概念，簡化了相關操作步驟，并取得了良好效果，制片清晰度大幅度提高。然而現有病理技術的術中冰凍制片質量不高，清晰度與標準石蠟切片比對仍有較大差距。

發明內容

基于背景技術存在的技術問題，本發明提出了一種高清晰度術中冰凍切片的制作方法。

本發明提出的一種高清晰度術中冰凍切片的制作方法，包括如下步驟：

S1首先，避免組織溶解、組織污染、組織破壞等干擾因素；

S2標本去除多余脂肪、毛發、線頭、鈣粒或骨碎片及其他硬物；

S3取材時用紗布吸取標本表面水分，作簡單的物理脫水。取材刀鋒利無損能減少組織損傷，提高取材質量；

S4加速組織冷凍技術，促使切片部位組織主要為玻璃態，為減少冰晶形成，應避免取材過厚過大及冰凍過慢過長，因水結晶時分為兩種結晶態，即玻璃態與晶體態，如腎臟組織質地嫩脆，冰凍過慢時間太長，切片易碎且組織細胞形態變形嚴重；

S5標本托放于速凍臺上，啟動速凍臺，當包埋劑底部由透明開始結凍變白時，將標本托移于冰錘盤并蓋上冰錘，標本凍硬后移于標本固定頭上并切片；

S6常規設置切片厚度為3mm，必要時可根據組織類型進行厚度調節，先將標本粗修至最大切面，再細修數次至平滑為止，減少粗修對切面造成的小裂隙，勻速轉動手輪進行切片，用帶靜電毛筆吸拉切片，用載玻片平整吸貼切片；

S7然后冰凍切片用95％乙醇作適度脫水及從外到內的滲透性固定30秒；

S8切片放入玻璃缸中，流水沖洗10秒；