[發明專利]DAAM1蛋白在制備腎透明細胞癌診斷及預后評估試劑盒中的應用

有效

• 申請號: 202011140916.9
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112326965B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 梅杰;朱一超;劉妍;劉雪;徐瑞
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 南京中律知識產權代理事務所(普通合伙) 32341
• 代理人: 李建芳

本發明提供DAAM1蛋白在制備腎透明細胞癌診斷和/或預后評估試劑盒中的應用。本發明還提供了腎透明細胞癌診斷和/或預后評估試劑盒，包括DAAM1單克隆抗體或多克隆抗體，以及免疫組化試劑。本發明發現采用免疫組化方法檢測DAAM1蛋白在腎透明細胞癌患者瘤組織中的表達量，基于DAAM1蛋白的表達量與腎透明細胞癌的這種相關性，以該蛋白作為分子標志物，對其表達量進行檢測可以作為用于診斷穿刺或外科手術所獲取的組織是否為腎透明細胞癌。此外，DAAM1蛋白表達與病理分級有關，DAAM1蛋白高表達的腎透明細胞癌患者預后較差，而DAAM1蛋白低表達的腎透明細胞癌患者預后較好。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說，是DAAM1蛋白在制備腎透明細胞癌診斷和預后評估試劑盒中的應用。

背景技術

腎細胞癌是起源于腎上皮細胞的惡性腫瘤，簡稱為腎癌，約占成人惡性腫瘤的2％～3％。2018年腎癌占全球新發腫瘤的2.2％，死亡率約為1.8％。在泌尿系統腫瘤中，腎癌的發病率僅次于膀胱癌；腎透明細胞癌是腎癌最常見的病理類型，約占80％左右。近年來，腎癌的發病率逐年上升，并且逐漸低齡化。對于早期腎癌，手術切除是主要的治療手段，且大部分早期腎癌的患者可通過手術治療得到根治。然而，由于腎癌早期癥狀不明顯，在確診時通常就有20～30％的患者存在轉移性病變，錯過了手術最佳時間。

目前臨床上尚無早期篩查腎透明細胞癌的特異性工具。隨著影像學的發展，尤其是超聲的廣泛應用和CT檢測的普及，越來越多的腎癌被早期診斷。但是依然有相當多的患者發現時已經是晚期或者局部晚期，單純手術預后差。腎透明細胞癌具有較高的惡性傾向，25％-30％的患者確診時已是晚期。腎癌惡性程度和分期通常決定其手術方式，術前影像學檢查只能判別其臨床分期，尚不能提示腫瘤惡性程度。所以對腎透明細胞癌患者的早期診斷對于該病的惡性程度辨別及預后復發判斷的十分重要，但是目前對于腎透明細胞癌乃至多數實體瘤來說尚未找到合適的早期診斷和預后隨訪生物標志物。

因此，尋找新的診斷和預后評估生物標志物是目前該領域急需解決的問題。

形態發生紊亂關聯激活因子1(Disheveled-associated activator ofmorphogenesis 1，DAAM1)是形成素蛋白家族的成員，此蛋白含有1068個氨基酸并在人類各組織中廣泛表達。目前，尚無DAAM1在腎透明細胞癌中相關的研究報道，并且目前還未見DAAM1蛋白在制備腎透明細胞癌診斷或預測腎透明細胞癌患者預后的應用的研究報道。

發明內容

技術問題：本發明的目的在于提供DAAM1蛋白的新應用，特別是在制備腎透明細胞癌診斷和預后評估試劑盒中的應用。

技術方案：本發明提供DAAM1蛋白在制備腎透明細胞癌診斷和/或預后評估試劑盒中的應用。

本發明還提供了腎透明細胞癌診斷和/或預后評估試劑盒，包括DAAM1單克隆抗體或多克隆抗體，以及免疫組化試劑。

本發明還提供了一種腎透明細胞癌診斷和/或預后評估試劑盒，包括DAAM1單克隆抗體或多克隆抗體，3％H₂O₂溶液，1％BSA封閉液，DAB顯色試劑，蘇木素，辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG，二甲苯，乙醇。

本發明還提供了檢測DAAM1蛋白在腎透明細胞癌患者腫瘤組織中的表達量的方法，包括以下步驟：利用免疫組化試劑將腎透明細胞癌組織切片進行免疫組化染色；利用顯微鏡和成像裝置拍攝為數碼照片；根據半定量評分原則，給出免疫反應性得分IRS(immunoreactivity score)。

優選地，所述免疫組化試劑包括二甲苯、乙醇、3％H₂O₂溶液、1％BSA封閉液、DAB顯色試劑、蘇木素和辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG。

本發明還提供了一種檢測DAAM1蛋白在腎透明細胞癌患者腫瘤組織中的表達量的方法，包括以下步驟：