[發明專利]三維細胞模型放射性藥物體外篩選及生物效應評價方法

在審

• 申請號: 202011138948.5
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112251486A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 王靜;楊夏;錢達志;趙鵬;王關全;卓連剛;廖偉;楊宇川
• 申請（專利權）人: 中國工程物理研究院核物理與化學研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/09
• 代理公司: 成都帝鵬知識產權代理事務所(普通合伙) 51265
• 代理人: 李華

1.一種基于三維細胞模型的放射性藥物體外篩選及生物效應評價方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)構建羥基磷灰石-磷酸化透明質酸體外三維細胞模型培養基質；

(2)構建人骨肉瘤體外三維細胞模型；

(3)將不同放射性活度的¹⁷⁷Lu-Herceptin加入人骨肉瘤MG63的三維細胞模型中，37℃條件下孵育4小時；取每孔的上清培養液，用4℃預冷的1M磷酸緩沖液浸泡細胞模型2分鐘，并將浸泡液與上清液合并，采用Gamma Counter進行放射性計數；對模型中的細胞采用胰酶進行消化，使其與基質分離，收集細胞液，采用Gamma Counter進行放射性計數。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中所述體外三維細胞模型培養基質的構建方法為：將磷酸化的透明質酸溶解在磷酸緩沖液中形成40mg/ml的溶液，將納米羥基磷灰石納米顆粒分散在純水中得到120mg/ml的溶液，在注射器中等體積的混勻兩種溶液，將混合物在1分鐘內迅速注射入固定形狀模具，放置10分鐘后羥基磷灰石-磷酸化透明質酸體外細胞培養基質，最終磷酸化透明質酸的濃度為20mg/ml，羥基磷灰石濃度為60mg/ml。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述磷酸緩沖液為20mM PBS。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述人骨肉瘤體外三維細胞模型的構建方法為：人骨肉瘤MG63細胞消化、計數，用含有10％胎牛血清的DMEM高糖培養基重懸細胞，以10⁵cells/孔的密度接種于鋪有羥基磷灰石-磷酸化透明質酸體外細胞培養基質的24孔板中，放置于37℃，5％CO₂的培養箱中，連續培養10天，每隔2天換新鮮培養液。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述不同放射性活度的范圍為3～0.0029μCi。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述¹⁷⁷Lu-Herceptin的標記比活度為2mci/mg。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述磷酸緩沖液的pH＝7.4。