[發明專利]一種核酸檢測試劑盒、檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202011138650.4
• 申請日: 2020-05-19
• 公開（公告）號: CN112176107A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 馬培翔;王鑫杰
• 申請（專利權）人: 上海科技大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;黃益澍

1.一種核酸檢測試劑盒，其包括Cpf1檢測體系，其特征在于，所述Cpf1檢測體系包括：向導RNA、Cpf1蛋白、核酸探針和含錳離子的溶液；

所述Cpf1蛋白的氨基酸序列選自：

將如SEQ ID NO: 54所示的T152、G532和K538突變為R后的序列；或將如SEQ ID NO: 54所示的T152和G532突變為R后所示的序列；或將如SEQ ID NO: 55所示的E184、N607和K613突變為R后所示的序列；或將如SEQ ID NO: 55所示的E184和N607突變為R后所示的序列。

2.如權利要求1所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述含錳離子的溶液為硫酸錳、氯化錳或醋酸錳溶液；

所述核酸探針為單鏈DNA探針；

所述Cpf1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO. 41、40、35或34所示。

3.如權利要求2所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述單鏈DNA探針包括熒光標記。

4.如權利要求3所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述單鏈DNA探針在其5’端和3’端分別具有熒光基團和熒光淬滅基團。

5.如權利要求4所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述單鏈DNA探針在其5’端具有熒光基團和3’端具有熒光淬滅基團。

6.如權利要求5所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光基團為6-FAM、TET、CY3、CY5或ROX，所述熒光淬滅基團為BHQ1、BHQ2或BHQ3。

7.如權利要求2所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述單鏈DNA探針的序列為TTTATTT。

8.如權利要求1~7任一項所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述向導RNA為引導Cpf1蛋白特異性結合所述核酸的RNA。

9.如權利要求8所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述向導RNA為crRNA；所述crRNA為檢測病毒核酸的crRNA。

10.如權利要求9所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述crRNA為檢測SARS相關冠狀病毒或MERS-CoV病毒的crRNA。

11.如權利要求10所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述SARS相關冠狀病毒為冠狀病毒SARS-CoV或SARS-CoV-2。

12.如權利要求9所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述crRNA為檢測SARS-CoV病毒orf1ab基因的crRNA、檢測MERS-CoV病毒orf1a基因的crRNA、檢測MERS-CoV病毒upE基因的crRNA、檢測SARS-CoV-2病毒E基因的crRNA、檢測SARS-CoV-2病毒S基因的crRNA、檢測SARS-CoV-2病毒M基因的crRNA和/或檢測SARS-CoV-2病毒N基因的crRNA，所述orf1ab基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 11所示，所述orf1a基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 12所示，所述upE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 13所示，所述E基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 46所示；所述SARS-CoV-2-S基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 79所示；所述SARS-CoV-2-M基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:80所示；所述SARS-CoV-2-N基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 81所示。

13.如權利要求12所述的核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述crRNA的核苷酸序列如SEQID NO: 1-10、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 56-72中的一個或多個所示。