[發明專利]一種卵形鯧鲹性別快速鑒定引物、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202011134234.7
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112239779B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 郭梁;張殿昌;劉寶鎖;朱克誠;郭華陽;楊靜文;馬啟偉
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院南海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6879
• 分類號: C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華;劉艷麗

本發明公開了一種卵形鯧鲹性別快速鑒定引物，所述引物為引物P18?1，所述引物P18?1包括正向引物P18?1?F和反向引物P18?1?R，所述正向引物P18?1?F的堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示，所述反向引物P18?1?R的堿基序列如SEQ?ID?NO：2所示。還公開了包括上述引物的試劑盒以及利用上述引物快速鑒定卵形鯧鲹性別的方法，以及上述引物、試劑盒以及方法在鑒定卵形鯧鲹性別方面的應用。該引物，特異性好，靈敏度好，準確度高，鑒定成功率高達97％，相比于毛細管電泳鑒定方法，本申請方法不需復雜的設備，縮短了檢測周期，降低了檢測成本。

技術領域

本發明屬于卵形鯧鲹技術領域，具體涉及一種卵形鯧鲹性別快速鑒定引物、試劑盒及其應用。

背景技術

卵形鯧鲹(Trachinotus?ovatus)，屬鱸形目，鲹科，鯧鲹屬，俗稱金鯧、黃臘鯧、黃臘鲹。從2000年以后，國內開始大規模養殖，目前已經發展成為我國重要的海水養殖品種，是深遠海大規模養殖的最佳品種，2016年國內的產量為已達到12萬噸。雖然其養殖規模發展迅速，但是育種工作卻相對滯后。卵形鯧鲹雌雄個體在早期胚胎發育和幼魚階段并不表現出形態學上的差異，從體型大小和生殖器官體表特征無法對其雌雄進行鑒定。而在育種的研究和生產中必須進行活體性別鑒定，現有的分子生物學方法利用毛細管電泳才能進行性別鑒定，成本高昂。

現有技術存在的問題是：

(1)在科研工作中，可以通過解剖等方式對卵形鯧鲹的生理性別進行鑒定，但解剖必然造成解剖個體的死亡，且該方式效率低下，無法實現大規模鑒定。

(2)目前的生物技術能夠活體鑒別性別，但是采用的檢測技術是毛細管電泳，對設備要求高、成本高昂、步驟繁瑣。

而瓊脂糖凝膠電泳具有對設備要求低、成本低和操作簡單的優點，在當前技術條件下，如能開發出適合于瓊脂糖電泳檢測的性別分子標記及引物，則可解決上述缺陷。

發明內容

本發明的目的在于提供一種卵形鯧鲹性別快速鑒定引物和試劑盒，該引物是適合于瓊脂糖電泳檢測的性別分子標記引物，該引物特異性好，準確率和效率高。

本發明的目的還在于提供一種卵形鯧鲹性別快速鑒定方法，該方法對設備要求低、成本低，且操作簡潔。

本發明的最后一個目的在于提供上述引物、試劑盒以及方法在鑒定卵形鯧鲹性別方面的應用。

本發明的上述第一個目的可以通過以下技術方案來實現：一種卵形鯧鲹性別快速鑒定引物，所述引物為引物P18-1，所述引物P18-1包括正向引物P18-1-F和反向引物P18-1-R，所述正向引物P18-1-F的堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示，所述反向引物P18-1-R的堿基序列如SEQ?ID?NO：2所示。

具體的，引物P18-1的堿基序列如下：

正向引物P18-1-F：5’-atgggacacagacctcttcct-3’；

反向引物P18-1-R：5’-cacccagcagcataaacaaat-3’。

本發明還提供了一種卵形鯧鲹性別快速鑒定試劑盒，該試劑盒包括上述卵形鯧鲹性別快速鑒定引物。

本發明的上述第二個目的可以通過以下技術方案來實現：一種卵形鯧鲹性別快速鑒定方法，包括以下步驟：

(1)合成上述引物；

(2)提取待測卵形鯧鲹的基因組DNA；

(3)采用步驟(1)中的引物，以基因組DNA為模板，進行PCR擴增，采用瓊脂糖凝膠電泳法檢測擴增產物，電泳結果表明，雌性卵形鯧鲹擴增出兩個條帶，條帶大小分別為1824bp和1689bp，雄性卵形鯧鲹擴增出一個條帶，條帶大小為1689bp。