[發(fā)明專利]TRIP13基因突變引發(fā)卵子成熟障礙的卵子功能恢復(fù)制劑及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011133924.0
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112342238A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王磊;匡延平;桑慶
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué);珠海復(fù)旦創(chuàng)新研究院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/10;C12N15/866;C12N5/075;A61K48/00;A61K38/17;A61P15/08
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;陸尤

本發(fā)明屬于基因治療技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種TRIP13基因突變引發(fā)卵子成熟障礙的卵子功能恢復(fù)制劑及其使用方法。卵子成熟障礙患者臨床表現(xiàn)為試管嬰兒術(shù)中，患者促排后大多無法獲得成熟卵子或成熟卵子受精率低，無有效胚胎，因而試管嬰兒反復(fù)失敗。本發(fā)明提供的用于恢復(fù)由CDC20基因突變引發(fā)卵子成熟障礙的卵子功能的制劑，由一定濃度TRIP13cRNA或TRIP13蛋白質(zhì)配制而成；給患者的卵子注射上述制劑使患者卵子完成成熟過程或顯著提高受精率，并可獲得有效胚胎及最終建立妊娠。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因治療技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及TRIP13基因突變引發(fā)的卵子成熟障礙的卵子功能恢復(fù)制劑及其使用方法。

背景技術(shù)

成熟的精子與卵子通過正常受精產(chǎn)生全能性合子，是人類成功生殖的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此，卵子成熟障礙會導(dǎo)致女性不孕以及臨床輔助生殖反復(fù)失敗。臨床中卵子成熟障礙表型主要包括卵子始終無法成熟或成熟的卵子受精率低，患者需多次取卵才可能得到極少數(shù)有效胚胎或盡管多次取卵，仍然無法獲取有效胚胎。目前，TUBB8、PATL2等基因被發(fā)現(xiàn)與卵子成熟障礙有關(guān)。但是此2個基因突變僅能解釋極少數(shù)卵子成熟障礙患者，我們最近又發(fā)現(xiàn)TRIP13突變存在于多個卵子成熟障礙患者中(Zhang et al. Bi-allelic MissensePathogenic Variants in TRIP13 Cause Female Infertility Characterized byOocyte Maturation Arrest. Am J Hum Genet. 2020;107(1):15-23)。此外，目前輔助生殖臨床中，針對卵子成熟障礙患者，并無任何方法可以改善及治療。這些患者因而無法通過自身卵子獲得后代，采用供卵是這些患者的最好途徑。

基因治療，是指通過分子生物學(xué)手段對相應(yīng)基因進(jìn)行補(bǔ)充、抑制、修復(fù)、編輯等操作，以改善及治療相關(guān)遺傳病。基因治療方法已被用于多種疾病的治療，包括血友病(Rangarajan S et al. AAV5-Factor VIII Gene Transfer in Severe Hemophilia A. NEngl J Med. 2017;377:2519-2530)，脊肌萎縮癥(Mendell JR et al. Single-DoseGene-Replacement Therapy for Spinal Muscular Astrophy. N Engl J Med. 2017;377:1713-1722)，伯氏先天性黑內(nèi)障(Bainbridge et al. Long-term Effect of GeneTherapy on Leber’s Congenital Amaurosis. N Engl J Med. 2015;372:1887-1897)，高血脂癥 (Fitzgerald K, et al. A Highly Durable RNAi Therapeutic Inhibitor ofPCSK9.N Engl J Med. 2017;376:41-51)等等。但是，目前尚無任何基因治療應(yīng)用于生殖疾病的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對導(dǎo)致女性原發(fā)不孕的由TRIP13基因突變引發(fā)的卵子成熟障礙提供一種效果優(yōu)異、操作方便的卵子功能恢復(fù)制劑及其使用方法。

本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，卵子成熟障礙由TRIP13基因突變引發(fā)的，患者攜帶TRIP13基因突變表現(xiàn)為不孕，輔助生殖臨床中表現(xiàn)為卵子始終無法成熟或受精率低及試管嬰兒失敗。本發(fā)明通過對相應(yīng)患者卵子注射TRIP13cRNA或TRIP13蛋白，使突變卵子恢復(fù)正常成熟的功能，而后與精子受精，期望后續(xù)胚胎得以正常發(fā)育并形成有效胚胎及最終建立妊娠。

其中，TRIP13cRNA (cDNA)及TRIP13蛋白的序列如SEQ ID NO.1，SEQ IDNO.2所示。

本發(fā)明首先提供一種導(dǎo)致女性原發(fā)不孕的卵子成熟障礙的卵子功能恢復(fù)制劑，該制劑由一定濃度TRIP13cRNA或TRIP13蛋白質(zhì)配制而成；TRIP13cRNA的濃度為300-1000ng/ul；TRIP13蛋白質(zhì)的濃度為0.5-1mg/ml。