[發明專利]一種用于鑒定青花菜品種‘浙青100’的SNP標記

有效

• 申請號: 202011133432.1
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112029898B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 沈鈺森;顧宏輝;王建升;虞慧芳;趙振卿;盛小光
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.一種用于鑒定青花菜品種‘浙青100’引物組合，其特征在于，所述的引物組合為：

由正向引物F1、H1和反向引物C1組成，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~3所示；引物F1、H1、C1擴增的分子標記為KCM1001，分子標記KCM1001具有C/T多態性；

由正向引物F2、H2和反向引物C2組成，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4~6所示；引物F2、H2、C2擴增的分子標記為KCM1002，分子標記KCM1002具有A/G多態性；

由正向引物F3、H3和反向引物C3組成，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7~9所示；引物F3、H3、C3擴增的分子標記為KCM1003，分子標記KCM1003具有A/G多態性。

2.根據權利要求1所述的引物組合，其特征在于，引物F1、F2、F3的5'端連接有序列如SEQ ID NO.10所示的通用接頭，引物H1、H2、H3的5'端連接有序列如SEQ ID NO.11所示的通用接頭。

3.一種用于鑒定青花菜品種‘浙青100’的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒含有SEQID NO.1~9所示的引物組合。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，引物引物F1、F2、F3的5'端連接有序列如SEQ ID NO.10所示的通用接頭，引物引物H1、H2、H3的5'端連接有序列如SEQ ID NO.11所示的通用接頭。

5.一種鑒定青花菜品種‘浙青100’的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）提取待測青花菜基因組DNA；

2）利用權利要求2所述引物組合進行PCR擴增；

3）采用熒光檢測儀分析PCR擴增產物；當KCM1001、KCM1002、KCM1003的基因型結果分別為TT、GG、AA，則可判定待測青花菜為‘浙青100’父本；當KCM1001、KCM1002、KCM1003的基因型結果分別為CC、AA、GG，則可判定待測青花菜為‘浙青100’母本；當KCM1001、KCM1002、KCM1003的基因型結果分別為TC、GA、AG，則可判定待測青花菜為‘浙青100’雜交種F1；缺失基因型除外的其它情況，則可判定待測青花菜為異型株。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，PCR反應體系為：PCR預混液5μL；引物混合液0.14μL，其中各引物的終濃度均為5nM；20ng/μL模板DNA 5μL。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，PCR反應程序為：94℃預變性15min；94℃變性20s，61-55℃退火延伸60s，每個循環的退火溫度降低0.6℃，共10個循環；94℃變性20s，55℃退火延伸60s，共26個循環。