[發明專利]一種基因構建重組質粒pEGFP-GRE-GP5gB及應用

有效

• 申請號: 202011130455.7
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112458115B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 金天明;李丹;藍肇煜;王小月;武靜橋;姚景麗;范真瑋;何敬文;陳婷;趙微
• 申請（專利權）人: 天津農學院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C12N15/40;C12N15/38;A61K39/12;A61K39/245;A61P31/14;A61P31/22
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 韓曉梅

本發明涉及一種PRRSV GP5片段、表位預測序列GRE及PRV gB基因三聯表位基因重組真核表達質粒pEGFP?GRE?GP5gB，其構建步驟如下：⑴GRE基因序列的設計與合成，PRV gB基因的偏好性密碼子優化；⑵構建重組穿梭載體pEGFP?GRE?GP5gB；⑶在Marc145及PK15細胞中轉染重組質粒pEGFP?GRE?GP5gB，能表達目的蛋白，即得重組真核表達質粒pEGFP?GRE?GP5gB。本發明旨在構建可以預防針對多株PRRSV，同時可以預防PRV的重組真核質粒，為畜牧業兩種疾病的防治提供一定的試驗依據。

技術領域

本發明屬于基因生物工程技術領域，尤其是一種PRRSV GP5片段、表位預測序列GRE 及PRV gB基因三聯表位基因重組真核表達質粒pEGFP-GRE-GP5gB及其應用。

背景技術

豬繁殖與呼吸障礙綜合征(PRRS)和豬偽狂犬病(PR)一直困擾著我國養豬業的健康發展。PRRSV是畜牧業中廣泛發生的一種豬病毒病，隱性感染亦可造成免疫抑制從而引起繼發感染。豬繁殖與呼吸障礙綜合征PRRS破壞生豬免疫系統的完整性，進而引起其他疾病繼發感染，豬偽狂犬PR能夠引起妊娠母豬流產、死胎，初生仔豬的大量死亡，育肥豬呼吸困難、生長停滯、公豬不育等癥狀，亦是危害全球養豬業的重大傳染病之一。

PRRSV變異性較大，傳統疫苗作用不甚理想。表位疫苗具有安全性好、保護力強和應答類型可調控等優點，可以通過在細胞內持續表達抗原的表位多肽，從而激活體內的特異性免疫細胞。GP5蛋白是一種是糖基化的囊膜蛋白，含有多個抗原表位，gB蛋白是PRV中最保守的蛋白，能介導病毒在細胞間的傳播，誘導動物體內產生補體依賴和補體非依賴兩種中和抗體。

目前，畜牧業上能夠預防多株PRRSV的基因工程疫苗尚未見報道。

通過檢索，尚未發現與本發明專利申請相關的專利公開文獻。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供一種PRRSV GP5片段、表位預測序列GRE及PRV gB基因三聯表位基因重組真核表達質粒pEGFP-GRE-GP5gB及其應用。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種PRRSV GP5片段、表位預測序列GRE及PRV gB基因三聯表位基因重組真核表達質粒pEGFP-GRE-GP5gB，其構建步驟如下：

⑴GRE基因序列的設計與合成，PRV gB基因的偏好性密碼子優化；

⑵構建重組穿梭載體pEGFP-GRE-GP5gB；

⑶在Marc145及PK15細胞中轉染重組質粒pEGFP-GRE-GP5gB，能表達目的蛋白，即得重組真核表達質粒pEGFP-GRE-GP5gB。

而且，其構建步驟如下：

⑴生物信息學分析并篩選出PRRSV GP5蛋白序列的保守區域，獲得具備免疫原性的 PRRSV GP5重組表位基因序列，優化獲得適合哺乳動物細胞表達的GRE基因序列；

⑵GRE-GP5gB基因的PCR擴增：以SEQ ID NO.3序列、SEQ ID NO.6序列擴增SEQ IDNO.11：GRE-GP5gB基因序列；

⑶重組真核表達質粒pEGFP-GRE-GP5gB，轉染Marc145及PK15細胞能表達目的蛋白，即得重組真核表達質粒pEGFP-GRE-GP5gB。

而且，其構建步驟如下：