[發(fā)明專利]甲型流感病毒與單純皰疹病毒1型雙重感染小鼠疾病模型的構(gòu)建方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011125529.8
• 申請日: 2020-10-20
• 公開（公告）號: CN114375896A
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊子峰;呂元君;鐘南山;周紅霞
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院;廣州呼吸健康研究院;鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44100
• 代理人: 曹愛紅;劉婉

本發(fā)明公開了一種甲型流感病毒與單純皰疹病毒1型雙重感染小鼠疾病模型的構(gòu)建方法，其包括以下步驟：1)建立單純皰疹病毒1型?甲型流感病毒小鼠疾病模型：使小鼠先感染單純皰疹病毒1型，三天后感染甲型流感病毒；2)建立單純皰疹病毒1型?甲型流感病毒共感染小鼠疾病模型：使小鼠同時(shí)感染甲型流感病毒和單純皰疹病毒1型；3)建立甲型流感病毒?單純皰疹病毒1型小鼠疾病模型：使小鼠先感染甲型流感病毒，三天后感染單純皰疹病毒1型；分別對以上三種小鼠疾病模型的生理指標(biāo)進(jìn)行檢測。本發(fā)明提供的方法構(gòu)建的疾病模型穩(wěn)定性高，操作簡便，具有臨床模擬性，可用于探究不同雙重感染模型中小鼠免疫反應(yīng)變化。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種甲型流感病毒與單純皰疹病毒1型雙重感染小鼠疾病模型及其構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

流感病毒(InfluenzaVirus,IV)是一種單股負(fù)鏈RNA包膜病毒，屬于正粘病毒科，根據(jù)核蛋白(nucleocapside protein，NP)和基質(zhì)蛋白(matrix protein，MP)，流感病毒分為甲、乙、丙、丁四型，其中甲型流感病毒(influenza A virus，IAV)的致病性最強(qiáng)，可引流感大流行。呼吸道粘膜上皮細(xì)胞是IAV攻擊機(jī)體的主要靶點(diǎn)。IAV感染機(jī)體后，依靠病毒的血凝素(Hemagglutinin,HA)粘附于呼吸道粘膜上皮細(xì)胞，通過胞飲作用進(jìn)入胞漿，進(jìn)行復(fù)制和組裝，最后以出芽方式釋放出來，感染其他細(xì)胞。IAV的復(fù)制周期約為8小時(shí)。IAV感染可引起呼吸道粘膜上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落、炎癥因子的釋放、粘膜充血水腫及分泌物增加等，從而引起一系列呼吸道癥狀。甲型流感病毒通常以每年的季節(jié)性流行為特征，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，每年季節(jié)性流感流行導(dǎo)致大約10億人感染，雖然季節(jié)性流感具有自限性，但由于流感病毒感染后可導(dǎo)致繼發(fā)性下呼吸道感染，患者會出現(xiàn)肺炎及嚴(yán)重的肺損傷。

HSV-1是一種嗜神經(jīng)性DNA病毒，可通過破損的皮膚或粘膜感染機(jī)體，引起局部病變。流行病學(xué)研究顯示，全球HSV-1的感染率為90％，多發(fā)生在嬰幼兒期。HSV-1除可以引起口唇、生殖器皰疹、皰疹性腦炎外，還可以引起呼吸道感染如支氣管炎、肺炎等。研究表明約1/3的ICU患者下呼吸道分泌物HSV-1為陽性；接受機(jī)械通氣患者，HSV-1在咽喉部檢出率為22％-54％，下呼吸道檢出率為16％-32％；ARDS患者中，肺泡灌洗液(Bronchoalveolarlavage fluid，BALF)中HSV-1的陽性率約57％。

研究顯示，HSV-1與RV共感染可引起急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratorydistress syndrome，ARDS)。但由于上述臨床研究數(shù)量有限，HSV-1的合并感染是否為病情加重的主要原因尚不清楚。因此建立IAV與HSV-1雙重感染小鼠模型，研究雙重感染的致病性尤為重要。

病毒雙重感染是病毒與病毒、病毒與宿主免疫細(xì)胞之間相互作用介導(dǎo)的多因素過程。病毒感染呼吸道上皮細(xì)胞后，激活機(jī)體抵抗病原微生物的第一道防御系統(tǒng)-固有免疫反應(yīng)。固有免疫系統(tǒng)主要由機(jī)體的物理屏障和固有免疫細(xì)胞(NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等)組成。固有免疫系統(tǒng)通過模式識別受體識別病毒表面的病原相關(guān)分子模式誘導(dǎo)干擾素、細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生，激活抗病毒免疫、中性粒細(xì)胞募集、巨噬細(xì)胞活化和樹突狀細(xì)胞的成熟等。正常情況下，機(jī)體的固有免疫反應(yīng)保持動態(tài)平衡，不平衡或不協(xié)調(diào)的免疫反應(yīng)，伴隨以過量細(xì)胞因子產(chǎn)生為特征的細(xì)胞因子風(fēng)暴，可加速疾病進(jìn)展及死亡等。固有免疫細(xì)胞和適應(yīng)性免疫反應(yīng)細(xì)胞的激活，以及細(xì)胞因子/趨化因子的產(chǎn)生是機(jī)體抵抗病毒侵襲的關(guān)鍵因素。因此，探討引起雙重感染的致病性差異以及固有免疫反應(yīng)變化，可為臨床處理IAV與HSV-1雙重感染提供依據(jù)和參考。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是針對以上要解決的技術(shù)問題，提供一種能夠成功構(gòu)建甲型流感病毒與單純皰疹病毒1型雙重感染小鼠疾病模型的方法。

為了實(shí)現(xiàn)以上發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種甲型流感病毒與單純皰疹病毒1型雙重感染小鼠疾病模型的構(gòu)建方法，其包括以下步驟：