[發明專利]一種血清及腦脊液中神經束蛋白NF155和NF186抗體的檢測方法

在審

• 申請號: 202011124467.9
• 申請日: 2020-10-20
• 公開（公告）號: CN112230002A
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 周煒;滕飛鵬;彭確昆
• 申請（專利權）人: 成都海默云因醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C07K14/705;C12N15/12;C12N15/85
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 史麗紅

1.一種血清及腦脊液中神經束蛋白NF155和NF186抗體的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、質粒的構建：將目的基因NF155和NF186分別與載體連接，獲得目的質粒；

S2、將步驟S1獲得的質粒轉染293T細胞，獲得病毒；

S3、將步驟S2獲得的病毒感染293T細胞，獲得轉染細胞；

S4、利用轉染細胞表達蛋白對血清和腦脊液中抗體進行檢測。

2.根據權利要求1所述的一種血清及腦脊液中神經束蛋白NF155和NF186抗體的檢測方法，其特征在于，所述步驟S1具體步驟如下：1)將純化的目的基因NF155和NF186分別與載體連接，連接產物分別命名為pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001160331.1]/EGFP以及pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001005388.3]/EGFP；2)分別取連接產物轉化超級感受態細胞；3)挑取菌落接種培養，提取質粒，得到目的質粒pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001160331.1]/EGFP和pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001005388.3]/EGFP。

3.根據權利要求1所述的一種血清及腦脊液中神經束蛋白NF155和NF186抗體的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2具體步驟如下：1)取293T細胞鋪板；2)取目的質粒分別與質粒pMDLg/pRRE，PMD2.G，pRSV-Rev，按比例8：8：2：2混勻；3)將2)的混合液加入1)細胞孔板中培養；3)收集病毒上清顆粒保存。

4.根據權利要求1所述的一種血清及腦脊液中神經束蛋白NF155和NF186抗體的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3具體步驟如下：1)取293T細胞培養；2)向細胞中加入含有病毒的培養基；3)設置不加病毒的細胞作為陰性對照，在第2天開始向培養基中加入嘌呤霉素，后續每天加大抗生素量，當對照細胞及未表過細胞全部死亡時，記錄藥篩濃度，保留藥篩后感染細胞。

5.根據權利要求1所述的一種血清及腦脊液中神經束蛋白NF155和NF186抗體的檢測方法，其特征在于，所述步驟S4具體步驟如下：1)去轉染細胞進行鋪片培養、固定、封閉、通透；2)向細胞中加入待檢測樣本反應；3)加入Alexa Fluor 555標記的羊抗人IgG反應；4)使用熒光顯微鏡。