[發(fā)明專利]一種快速提取植物韌皮部汁液的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011123064.2
• 申請日: 2020-10-20
• 公開（公告）號: CN112461572B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李青林;徐慧;張文濤;孫京京
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號: G01N1/04
• 分類號: G01N1/04;G01N1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供一種快速提取植物韌皮部汁液的方法，包括以下步驟：首先用乙醇消毒后的刀片快速將植株葉片切下，用去離子水沖洗斷面，并用脫脂棉吸取第一滴汁液，靜置1分鐘；然后使用毛細玻璃管，使其與葉柄斷面垂直；再將毛細玻璃管口對準斷面韌皮部篩管所滲出的汁液，依次將汁液提取到毛細玻璃管中；最后將吸取汁液后的毛細玻璃管尾端放置到吹塵球的出風(fēng)口里面，通過擠壓吹塵球?qū)⒅褐潦占苤胁⑹占苊芊夂迷俅鎯Α１景l(fā)明可以快速直接提取和收集韌皮部汁液，解決了韌皮部滲出汁液量少，韌皮部汁液的提取和收集都費時費力的問題。本發(fā)明操作簡單，成本低，中間污染少，提取的汁液純度的較高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于草本植株汁液提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速提取植物韌皮部汁液的方法。

背景技術(shù)

韌皮部是連接植物地上和地下部的重要維管組織，作為維管系統(tǒng)重要組成部分，不僅與維管系統(tǒng)其它部分一起發(fā)揮傳遞信息、機械支持的作用，還從光合產(chǎn)物形成部位運輸碳水化合物、氨基酸和其它營養(yǎng)物到營養(yǎng)的儲藏和代謝部位，在物質(zhì)運輸過程中發(fā)揮重要作用，且運輸和分配的結(jié)果直接影響植物的生長過程、產(chǎn)量和品質(zhì)。當(dāng)光合產(chǎn)物在韌皮部進行裝載和卸載時，可以清楚的了解到物質(zhì)的種類和變化，從而反映植株本身的健康狀況。進一步研究韌皮部汁液的成分來判斷植株的健康狀況，為植物養(yǎng)分狀態(tài)的檢測提供了新的思路。

現(xiàn)有韌皮部汁液提取的方法主要有：K₂-EDTA滲出法、切開法、蚜蟲吻針法、離心法等。K₂-EDTA滲出法主要是將葉柄的尖端或者一塊樹皮組織放在K₂-EDTA溶液中在溫室中孵育幾個小時，這種方法適用于大多數(shù)植物，可用于收集大量的韌皮部汁液。不足之處是通過K₂-EDTA方法獲得的韌皮部泌物可能被木質(zhì)部和其他組織的物質(zhì)污染。這種污染的源頭很可能是由于EDTA作為螯合劑的作用，它可能從進入滲出液的細胞壁釋放出金屬離子，例如Ca²⁺。切開方法可用于切割韌皮部組織如葫蘆和蓖麻子后“自發(fā)出血”的植物。蚜蟲吻針法主要是使用昆蟲探針來收集韌皮部汁液，在昆蟲進食韌皮部汁液的過程中切下探針，并使用微毛細管收集滲出液。該方法費力，費時并且可以收集的樣本量少，無法滿足正常的代謝物分析。且昆蟲唾液蛋白和其他成分可能會影響收集的韌皮部汁液的化學(xué)組成。離心法主要是通過樹汁來獲得韌皮部汁液，所以通過離心分離樹皮組織來實現(xiàn)的，這種方法雖然可以精確的估計韌皮部汁液成分，但是在離心的過程中細胞組分會對韌皮部汁液造成污染。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種快速提取植物韌皮部汁液的方法，采用毛細玻璃管-吹塵球相結(jié)合的方式，用毛細玻璃管對葉柄韌皮部汁液迅速提取，獲得汁液，再通過吹塵球的氣壓將毛細玻璃管中的汁液儲存到離心管中，可以快速直接提取和收集韌皮部汁液，解決了韌皮部滲出汁液量少，韌皮部汁液的提取和收集都費時費力的問題。本發(fā)明操作簡單，成本低，中間污染少，提取的汁液純度的較高。

本發(fā)明根據(jù)電鏡觀察的葉柄結(jié)構(gòu)確定維管束的位置；首先用乙醇消毒后的刀片快速將植株葉片切下，用去離子水沖洗斷面，并用脫脂棉吸取第一滴汁液，靜置1分鐘；然后使用毛細玻璃管，使其與葉柄斷面垂直；再將毛細玻璃管口對準斷面韌皮部篩管所滲出的汁液，依次將汁液提取到毛細玻璃管中；最后將吸取汁液后的毛細玻璃管尾端放置到吹塵球的出風(fēng)口里面，通過擠壓吹塵球?qū)⒅簤褐潦占苤胁⑹占苊芊夂迷俅鎯Α?/p>

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種快速提取植物韌皮部汁液的方法，包括以下步驟：

準備工作：準備毛細玻璃管、吹塵球、刀片、收集管；在取樣之前選擇同株樣本，通過電子顯微鏡先找到植物葉片的葉柄斷面處的維管束，得到葉柄斷面處的維管束結(jié)構(gòu)圖；

葉柄切割：用消毒后的刀片從植物的葉柄靠近莖稈處將葉子切下，將切下的葉片的葉柄斷面朝下；

傷口處理：用去離子水沖洗葉片的葉柄斷面?zhèn)谔帲?/p>