[發(fā)明專利]蛋白肽、凍干粉、口服液及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011122685.9
• 申請(qǐng)日: 2020-10-20
• 公開（公告）號(hào): CN112251402A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張尚權(quán);陳宇光;徐劍飛;趙婧伽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 埃爾利生物技術(shù)（上海）有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/078
• 分類號(hào): C12N5/078;C12P21/00;A61K38/01;A61K9/19;A61K9/08;A61P37/04;A61P39/06;A61P35/00
• 代理公司: 上海三方專利事務(wù)所(普通合伙) 31127
• 代理人: 吳瑋;徐成澤

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種蛋白肽、凍干粉、口服液及其制備方法，將無酚紅RPMI、動(dòng)物血漿與動(dòng)物的自體脾臟混合培養(yǎng)以誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞因子，然后將動(dòng)物的自體脾臟的脾細(xì)胞作為滋養(yǎng)層與誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子及RPMI培養(yǎng)液一起加入動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞中擴(kuò)增培養(yǎng)若干天。本發(fā)明同現(xiàn)有技術(shù)相比，其優(yōu)點(diǎn)在于：利用動(dòng)物體的二大免疫細(xì)胞白細(xì)胞與脾臟細(xì)胞，使白細(xì)胞中主要PBMC細(xì)胞，在脾臟細(xì)胞作為滋養(yǎng)層細(xì)胞的條件下，放大到30～100倍以上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種蛋白肽、凍干粉、口服液 及其制備方法。

背景技術(shù)

功能蛋白、功能肽經(jīng)人體吸收后會(huì)增強(qiáng)人體免疫功能，蛋白質(zhì)氨基酸組成 的不同決定了該蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)及體內(nèi)消化酶解產(chǎn)生的多肽種類與數(shù)量。蛋白質(zhì) 經(jīng)酶解或水解產(chǎn)物可被續(xù)分為兩類，即功能肽和營養(yǎng)肽及氨基酸等，其中功能 肽參與調(diào)節(jié)動(dòng)物的生理活動(dòng)或具有某特殊的作用，如抗菌肽免疫功能肽、抗氧 化肽、激素肽、生長類肽、外泌體蛋白等，而營養(yǎng)肽則不具備調(diào)節(jié)生理功能。

從中反應(yīng)出用生物培養(yǎng)擴(kuò)增方式富集生物功能蛋白肽是尤為重要的，此理 論觀點(diǎn)似乎與中國經(jīng)典中醫(yī)：安身之本必資于食(食甲者則補(bǔ)甲論)相吻合。

人體攝入的小肽、多肽可在小腸近端直接吸收入血循環(huán)進(jìn)入細(xì)胞，并直接 組裝成蛋白質(zhì)，而氨基酸進(jìn)入人體血液經(jīng)肝臟合成小肽、多肽后才被人體利用， 此說明小肽、多肽合成蛋白質(zhì)比率遠(yuǎn)高于氨基酸，并且與合成功能蛋白質(zhì)相關(guān)。

在小肽的研究進(jìn)展中，施用暉等人發(fā)現(xiàn)在產(chǎn)蛋雞飼料中添加酪蛋白水解肽 能使血漿中的酪蛋白肽增加雞蛋的產(chǎn)率顯著提高。

Backwell用同位素標(biāo)記乳蛋白技術(shù)說明了多肽與合成功能蛋白的關(guān)系，功 能蛋白生理活性表示小肽不僅可合成蛋白質(zhì)，還可將功能肽結(jié)構(gòu)方面的信息提 供給宿主，而表達(dá)出與氨基酸完全不同的生理作用。

中國藥理學(xué)報(bào)(2013July29(7)897～9)說明了口服多肽類藥物(功能肽 類)大多數(shù)具有生理活性，如生命中細(xì)胞分化、神經(jīng)、激素與遞質(zhì)調(diào)節(jié)、免疫 調(diào)節(jié)及腫瘤發(fā)生等生理、病理過程均與活性多肽密切相關(guān)。

2016年11月1日題為The mesentery：structure tanction and role indisease的研究證實(shí)人類身體里存在一個(gè)迄今尚未被承認(rèn)的新器官-腸系膜， 該研究改寫和更新了世界最知名的醫(yī)學(xué)教材之一的《Grays Anatomy》，認(rèn)為連 接腸和軀體的腸系膜其實(shí)是一個(gè)連續(xù)的器官，從而推測人體內(nèi)消化與吸收有隨 機(jī)性也有模式性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種蛋白肽、凍干粉、口服 液及其制備方法，巧妙地運(yùn)用動(dòng)物體內(nèi)動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞和脾臟細(xì)胞，以脾臟細(xì) 胞作為滋養(yǎng)層誘導(dǎo)培養(yǎng)單個(gè)核細(xì)胞PBMC，使動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞PBMC生物功能 肽的擴(kuò)增。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，設(shè)計(jì)一種蛋白肽的制備方法，所述的方法將無酚紅RPMI 完全培養(yǎng)液、動(dòng)物血漿與動(dòng)物的自體脾臟混合培養(yǎng)以誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞因子，然后 將動(dòng)物的自體脾臟的脾細(xì)胞作為滋養(yǎng)層與誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子培養(yǎng)液一起加入 動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞PBMC中擴(kuò)增培養(yǎng)若干天，培養(yǎng)后通過離心法獲得細(xì)胞與上清液 A，并在所述的上清液A加入5％甘露醇后混勻，以獲得所述的蛋白肽。

所述的方法具體包括如下步驟：收集動(dòng)物血漿中的動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞PBMC， 并加入無酚紅RPMI完全培養(yǎng)液，而后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)若干天，培養(yǎng)后再加入 無酚紅RPMI完全培養(yǎng)液，并繼續(xù)置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)若干天。

將所述的細(xì)胞培養(yǎng)液與動(dòng)物的自體脾臟細(xì)胞混合，并置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)若 干天。

培養(yǎng)后，再向細(xì)胞培養(yǎng)液與動(dòng)物的自體脾臟細(xì)胞中加入無酚紅RPMI完全培 養(yǎng)液再次培養(yǎng)若干天，培養(yǎng)后再加入無酚紅RPMI完全培養(yǎng)液，并再次置于培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)若干天。