[發明專利]調控雄性褐飛虱精液Selenoprotein F的dsRNA序列及用途

在審

• 申請號: 202011122641.6
• 申請日: 2020-10-19
• 公開（公告）號: CN112195180A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 戈林泉;江璐;周泳凱;陳宇;張杰鈺;武慶
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;A01N57/16;A01P7/04
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

本發明公開了調控雄性褐飛虱精液Selenoprotein F的dsRNA序列及用途，該dsRNA序列如SEQ ID NO.1所示。通過RNAi干擾技術，注射dsRNA干擾雄性褐飛虱Selenoprotein F基因后，雄性褐飛虱輸精管顯著畸形，與其交配后的雌蟲受精囊內精子數量顯著減少，有效地降低了褐飛虱產卵量和卵孵化率，控制褐飛虱種群數量，有望在實現抑制害蟲的同時充分發揮生態防治的功能。本發明將在作物育種，生物農藥研發和生物防治中得到廣泛的應用。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，特別涉及調控雄性褐飛虱精液SelenoproteinF的dsRNA序列及用途。

背景技術

褐飛虱Nilaparvata lugens屬半翅目，飛虱科，是我國及許多亞洲國家水稻上的首要害蟲。褐飛虱為單食性害蟲，只能在水稻上和普通的野生稻上取食和繁殖后代。水稻被褐飛虱危害嚴重時，會造成水稻大面積死亡，出現“飛虱火燒”的現象。褐飛虱一旦暴發成災，便會對水稻生產造成嚴重損失。目前，褐飛虱的防治工作仍以化學防治為主。但隨著各類化學藥劑的長期大量使用，褐飛虱容易產生抗藥性，進一步促進了化學藥劑的過度使用，造成嚴重的環境污染，威脅人類的健康及破壞農業生態平衡。因此，在農業生產實踐中，急需尋找到一種替代化學防治的方法。

RNAi技術是通過降解靶基因的mRNA或mRNA的3’末端的非轉錄片段結合而阻止基因的表達使特異性基因發生沉默的一種高度保守基因調控機制。由于RNAi具有靶標特異性，高效性，持久性，快捷性等優點，現已廣泛用于多種生物的基因功能的研究中。在害蟲防治領域，RNAi技術作來一種新型的害蟲防治策略近幾年已被人們逐漸接受，并在實驗室條件下成功應用于鱗翅目、鞘翅目、半翅目等害蟲。在RNAi研究中，合適的靶基因和適當的導入方法是其成功的關鍵。在昆蟲學研究中，現主要采用微量注射法、飼喂法和轉基因植物法。

硒蛋白Selenoprotein F在哺乳動物體內能夠保護精液，在雄性生殖力起著至關重要的作用。硒蛋白缺失導致精子活力降低，精子壽命縮短。

發明內容

發明目的：本發明目的是提供調控雄性褐飛虱精液Selenoprotein F的dsRNA序列。

本發明另一目的是提供所述dsRNA序列在制備防治褐飛虱藥劑中的用途。

本發明最后一目的是提供調控雄性褐飛虱精液的RNAi干擾方法。

本發明利用褐飛虱精液蛋白組成成分的轉錄組數據，獲得一種調控雄性褐飛虱精液的硒蛋白Selenoprotein F基因，并以該基因cDNA為模板，設計引物合成相應的dsRNA。通過dsRNA微量注射，實現調控褐飛虱精子傳導等生殖功能的影響。

技術方案：本發明提供一種調控雄性褐飛虱精液Selenoprotein F的dsRNA序列，如SEQ ID NO.1所示。

一種擴增權利要求1所述的dsRNA序列的引物，如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示。

一種權利要求1所述dsRNA序列在制備防治褐飛虱藥劑中的用途。

一種調控雄性褐飛虱精液的RNAi干擾方法，將權利要求1所述的dsRNA序列通過顯微注射法注入剛羽化的褐飛虱成蟲體內。

進一步地，所述褐飛虱為單頭褐飛虱。

進一步地，單頭褐飛虱注射dsRNA的量為80ng-100ng。

有益效果：本發明的dsRNA對剛羽化雄性褐飛虱進行RNAi注射，注射dsRNA后1天，3天，5天，和7天后，其雄性褐飛虱體內Selenoprotein F相對表達水平顯著下降，同時褐飛虱精子傳輸過程受阻，降低褐飛虱產卵量和卵孵化率，子代種群數量顯著減少，有效地控制褐飛虱種群數量。

附圖說明