[發(fā)明專利]E184L基因缺失減毒非洲豬瘟病毒株的構(gòu)建及其作為疫苗的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011121313.4
• 申請日: 2020-10-20
• 公開（公告）號: CN112245568B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭海學;朱紫祥;李莎莎;黨文;楊帆;曹偉軍;楊金平;劉會勝;劉華南;田宏;張克山;孫研;劉湘濤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: A61K38/16
• 分類號: A61K38/16;A61K39/12;A61P37/06;A61P31/20;C12N7/04;C12N15/85
• 代理公司: 北京力量專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 戴治娟

1.非洲豬瘟病毒E184L蛋白在制備免疫抑制劑中的應(yīng)用。

2.非洲豬瘟病毒E184L蛋白在制備抑制I型干擾素，和/或促炎性細胞因子，和/或干擾素刺激基因ISGs產(chǎn)生的藥物或藥物組合物中的應(yīng)用。

3.通過缺失非洲豬瘟病毒E184L基因編碼蛋白的功能制備減毒非洲豬瘟病毒株的應(yīng)用，所述缺失非洲豬瘟病毒E184L基因編碼蛋白的功能是指通過缺失非洲豬瘟病毒E184L基因的全部或部分核苷酸序列使非洲豬瘟病毒E184L基因編碼蛋白的功能喪失。

4.一種E184L基因編碼蛋白功能喪失的減毒非洲豬瘟病毒株，其特征在于，所述減毒非洲豬瘟病毒株包括將親本非洲豬瘟病毒株E184L基因編碼蛋白的功能喪失，所述將親本非洲豬瘟病毒株E184L基因編碼蛋白的功能喪失是指將非洲豬瘟病毒E184L基因的全部或部分核苷酸序列缺失。

5. 如權(quán)利要求4所述的E184L基因編碼蛋白功能喪失的減毒非洲豬瘟病毒株，其特征在于，所述親本非洲豬瘟病毒株為ASFV/CN/GS/2018分離株；所述E184L基因編碼蛋白功能喪失的減毒非洲豬瘟病毒株相較于ASFV/CN/GS/2018分離株全長序列缺失了如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

6.一種非洲豬瘟疫苗，其特征在于，所述非洲豬瘟疫苗包含權(quán)利要求4-5任一所述的E184L基因編碼蛋白功能喪失的減毒非洲豬瘟病毒株。

7.如權(quán)利要求4-5任一所述E184L基因編碼蛋白功能喪失的減毒非洲豬瘟病毒株的制備方法，其特征在于，所述方法為：通過基因工程手段將親本非洲豬瘟病毒株E184L基因的全部或部分核苷酸序列缺失使E184L基因編碼蛋白的功能喪失。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法為同源重組技術(shù)，所述方法包括以下步驟：

（1）設(shè)計ASFV E184L基因上下游序列作為左右同源重組臂，并分別克隆入pUC19載體中，獲得重組轉(zhuǎn)移載體；

（2）在步驟（1）所述重組轉(zhuǎn)移載體左、右臂基因序列中插入篩選表達盒基因片段，獲得同源重組轉(zhuǎn)移載體；

（3）將步驟（2）所述同源重組轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染至感染了親本非洲豬瘟毒株的 BMDM細胞，純化篩選獲得E184L基因編碼蛋白功能喪失的減毒非洲豬瘟病毒株。

9.如權(quán)利要求7或8所述方法制備獲得的E184L基因編碼蛋白功能喪失的減毒非洲豬瘟病毒株。