[發明專利]一種芝麻未授粉子房離體培養愈傷組織誘導方法

在審

• 申請號: 202011118659.9
• 申請日: 2020-10-19
• 公開（公告）號: CN111972293A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 任西華;張小林
• 申請（專利權）人: 江蘇春之雨生物科技發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 長沙新裕知識產權代理有限公司 43210
• 代理人: 劉加

1.一種芝麻未授粉子房離體培養愈傷組織誘導方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）材料選取與消毒：選擇生長健壯、無病蟲害的芝麻植株，采集開花前1~2d花藥未開裂的未授粉花蕾；將花蕾進行消毒處理：先用75%酒精消毒30s，無菌水沖洗1次，再用3%次氯酸鈉消毒8min，無菌水沖洗4~5次，用無菌濾紙吸干表面水分；

（2）外植體預處理：在無菌條件下從花蕾中剝取子房作為外植體，放入一定濃度的維生素C溶液中浸泡處理2h；

（3）外植體接種與誘導培養：將外植體平放接種于誘導培養基上，先進行24~48h的熱激處理，然后在23~28℃的培養溫度下進行誘導培養，培養期間前30d為暗培養，后改為光照培養直至外植體上誘導出愈傷組織。

2.根據權利要求1所述的一種芝麻未授粉子房離體培養愈傷組織誘導方法，其特征在于，所述步驟（2）中，維生素C溶液的濃度為70~80mg/L。

3.根據權利要求1所述的一種芝麻未授粉子房離體培養愈傷組織誘導方法，其特征在于，所述步驟（3）中，誘導培養基成分為：KNO₃ 1750-2050mg/L，NH₄NO₃ 1100-1400mg/L，KH₂PO₄ 145-175mg/L，CaCl₂·2H₂O 480-510mg/L，MgSO₄·7H₂O 320-350mg/L，MnSO₄·4H₂O10.3-13.5mg/L，ZnSO₄·7H₂O 7.2-9.0mg/L，H₃BO₃ 5.6-7.4mg/L，KI 0.8-0.9mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2-0.3mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.05-0.15mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.02-0.03mg/L，乳酸亞鐵28.3-31.1mg/L，肌醇80-100mg/L，丙酮酸鈉20-30mg/L，甘氨酸2.0-4.0mg/L，脯氨酸20-30mg/L，天門冬酰胺45-55mg/L，維生素B1 3.6-4.4mg/L，維生素B6 0.6-1.0mg/L，牛磺酸1.4-1.8mg/L，D-生物素0.08-0.1mg/L，KT 0.8-1.2mg/L，2，4-D 1.8-2.2mg/L，馬來酰肼1.5-2.5mg/L，核苷酸5.8-7.0mg/L，百合浸提液20-40ml/L，丁酸鈉80~120μmol/L，蔗糖46-54g/L，瓊脂6-8g/L，pH值為5.6-6.0。

4.根據權利要求1所述的一種芝麻未授粉子房離體培養愈傷組織誘導方法，其特征在于，所述步驟（3）中，熱激處理的溫度為32~35℃。

5.根據權利要求1所述的一種芝麻未授粉子房離體培養愈傷組織誘導方法，其特征在于，所述步驟（3）中，光照培養的條件為：光照時間10~14h/d，光照強度1000~2000lx。

6.根據權利要求3所述的一種芝麻未授粉子房離體培養愈傷組織誘導方法，其特征在于，所述誘導培養基中百合浸提液的制備方法為：稱取一定量的百合鱗片用研缽研碎，按照1∶1.5（g/ml）的料液比加入生理鹽水浸泡4h，用雙層紗布過濾，將濾液以3000r/min離心10min，取上清液備用。