[發明專利]一種松褐天牛活體固氮活性的測定方法

在審

• 申請號: 202011118593.3
• 申請日: 2020-10-19
• 公開（公告）號: CN112305101A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 金明霞;喻愛林;謝谷艾;劉曉華;熊彩云;嚴員英;闕生全;萬靜;涂業茍;王文輝
• 申請（專利權）人: 江西省林業科學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86;A01K67/033
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 趙徐平

1.一種松褐天牛活體固氮活性的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在松材線蟲病疫區懸掛松褐天牛誘捕器收集松褐天牛成蟲，對疫木進行解剖獲取松褐天牛幼蟲；

(2)挑選2-3年齡，個體大小和健康程度一致的成蟲和幼蟲；

(3)將挑選的松褐天牛成蟲和幼蟲均用酒精清洗2-3遍，再用水清洗2-3遍，得松褐天牛成蟲和幼蟲樣品；

(4)標準氣體的配置：分別移取100μl、10μl、5μl、2μl、1μl、0.6μl、0.2μl標準乙烯氣體注入對應的20-30ml頂空瓶中，配制成系列標準氣體，從每個頂空瓶中抽出1ml氣體，然后再注入1ml標準乙炔氣體；

(5)樣品前處理：取松褐天牛成蟲或幼蟲樣品置于步驟(4)所述20-30ml頂空瓶中，壓蓋封口，從頂空瓶中抽出1ml氣體然后再注入1ml標準乙炔氣體，置于培養箱中保溫培養；

(6)培養2-4小時后用氣相色譜儀檢測標準氣體和前處理后樣品生成的乙烯含量；

(7)計算出標準氣體的線性回歸方程：Y＝8E+06X-166206

(8)采用公式

計算固氮活性。

2.根據權利要求1所述一種松褐天牛活體固氮活性的測定方法，其特征在于，所述氣相色譜儀檢測條件為：毛細管柱采用PLOT/Q填充毛細管色譜柱，長度30m×內徑0.53mm×膜厚40m，載氣為氮氣，載氣流速為2.0mL/min；進樣口溫度：200℃，分流比10:1；升溫程序：恒定溫度60℃，保持6min；FID檢測器：溫度250℃，氫氣40mL/min，空氣450mL/min，尾吹氦氣30mL/min。

3.根據權利要求1所述一種松褐天牛活體固氮活性的測定方法，其特征在于，步驟(3)所述酒精體積濃度為75％，所述水為純水。

4.根據權利要求1所述一種松褐天牛活體固氮活性的測定方法，其特征在于，步驟(5)所述保溫溫度為26℃-28℃。