[發(fā)明專利]一種構(gòu)建體及其在制備動(dòng)物衰老細(xì)胞示蹤和衰老細(xì)胞清除藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011118092.5
• 申請(qǐng)日: 2020-10-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112280800B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何志穎;劉中民;陳苗苗;潘欣;盧艷麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市東方醫(yī)院（同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院）
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/65;C12N5/10;A01K67/027
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種分離的構(gòu)建體，其特征在于，所述構(gòu)建體靶向于P21基因，且包含有報(bào)告基因和白喉毒素受體基因；所述構(gòu)建體能夠改造細(xì)胞或動(dòng)物的基因組，在細(xì)胞或動(dòng)物體中進(jìn)行衰老細(xì)胞定位、示蹤、分選、誘導(dǎo)衰老細(xì)胞凋亡和/或清除衰老細(xì)胞；所述構(gòu)建體從5’至3’依次包含以下可操作性相連的元件：AkaLuc，tdTomato和白喉毒素受體基因；其中，AkaLuc的5’端、AkaLuc與tdTomato之間、tdTomato與白喉毒素受體基因之間包括2A序列；白喉毒素受體基因的3’端包括終止子；所述構(gòu)建體還包括2個(gè)FLP識(shí)別位點(diǎn)，2個(gè)FLP識(shí)別位點(diǎn)之間為正篩選標(biāo)記基因。

2.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建體，其特征在于，所述構(gòu)建體靶向于P21基因的3號(hào)外顯子。

3.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建體，其特征在于，所述構(gòu)建體靶向于P21基因的3號(hào)外顯子的第47位堿基之后。

4.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建體，其特征在于，所述終止子為多聚A。

5.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建體，其特征在于，所述正篩選標(biāo)記基因?yàn)镻GK-Neo和/或DDSDC-Neo。

6.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建體，其特征在于，所述構(gòu)建體還包括單純皰疹病毒胸苷激酶負(fù)篩選基因。

7.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建體，其特征在于，所述構(gòu)建體的兩端還分別包括5’同源臂序列和3’同源臂序列。

8.權(quán)利要求1～7任一所述的構(gòu)建體在制備靶向于P21基因改造細(xì)胞或動(dòng)物的基因組，在細(xì)胞或動(dòng)物體中進(jìn)行衰老細(xì)胞定位、示蹤、分選、誘導(dǎo)衰老細(xì)胞凋亡和/或清除衰老細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用；所述構(gòu)建體靶向于P21基因的3號(hào)外顯子中。

9.一種細(xì)胞，其基因組中整合有外源的權(quán)利要求1～7任一所述的構(gòu)建體，所述構(gòu)建體整合于細(xì)胞的P21基因的3號(hào)外顯子，所述的細(xì)胞為胚胎干細(xì)胞、體細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞；所述胚胎干細(xì)胞是商品化的或已建系的細(xì)胞。

10.如權(quán)利要求9所述的細(xì)胞，其特征在于，所述的體細(xì)胞為成纖維細(xì)胞，上皮細(xì)胞或血液細(xì)胞。

11.如權(quán)利要求10所述的細(xì)胞，其特征在于，所述的體細(xì)胞為組織或器官來(lái)源的細(xì)胞。

12.權(quán)利要求1～7任一所述的構(gòu)建體在制備對(duì)衰老細(xì)胞進(jìn)行定位、示蹤、分選、誘導(dǎo)衰老細(xì)胞凋亡和/或清除衰老細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用，其中所述的對(duì)衰老細(xì)胞進(jìn)行定位、示蹤、分選、誘導(dǎo)衰老細(xì)胞凋亡和/或清除衰老細(xì)胞包括：

(1) 將權(quán)利要求1～7任一所述的構(gòu)建體轉(zhuǎn)染受試細(xì)胞，獲得基因組中整合有外源構(gòu)建體的細(xì)胞；

(2) 觀察細(xì)胞中報(bào)告基因的表達(dá)情況，從而定位、示蹤、分選衰老細(xì)胞，誘導(dǎo)所述衰老細(xì)胞凋亡和/或清除衰老細(xì)胞；

所述的受試細(xì)胞為胚胎干細(xì)胞、體細(xì)胞、生殖細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞；所述胚胎干細(xì)胞為商品化的或已建系的細(xì)胞，所述生殖細(xì)胞為受精卵，卵母細(xì)胞或精子。

13.如權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的體細(xì)胞為成纖維細(xì)胞，上皮細(xì)胞或血液細(xì)胞。

14.如權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的體細(xì)胞為組織或器官來(lái)源的細(xì)胞。

15.一種制備非人哺乳動(dòng)物的方法，所述非人哺乳動(dòng)物中的衰老細(xì)胞能被定位、示蹤、被誘導(dǎo)凋亡和/或被清除，所述方法包括：

(1) 將權(quán)利要求1～7任一所述的構(gòu)建體引入到胚胎干細(xì)胞或生殖細(xì)胞中，獲得基因組中整合入所述構(gòu)建體的胚胎干細(xì)胞或生殖細(xì)胞；所述胚胎干細(xì)胞是商品化的或已建系的細(xì)胞；

(2) 利用所述胚胎干細(xì)胞或生殖細(xì)胞產(chǎn)生動(dòng)物體，所述動(dòng)物體能進(jìn)行衰老細(xì)胞示蹤，或其衰老細(xì)胞能被誘導(dǎo)發(fā)生凋亡。