[發明專利]一種竹節誘導愈傷組織再生植株的方法

有效

• 申請號: 202011114363.X
• 申請日: 2020-10-19
• 公開（公告）號: CN112189562B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 楊海蕓;王潔
• 申請（專利權）人: 浙江農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發明提供了一種竹節誘導愈傷組織再生植株的方法，屬于植物組織培養技術領域。本發明將消毒的試管苗切取長度0.1～8cm帶芽竹節為外植體，接種至含1～3mg/L2,4?D的MS培養基上誘導培養，得到愈傷組織；將愈傷組織接種至增殖培養基上增殖培養，得到的顆粒致密的愈傷組織接種至含0.5～2mg/L6?BA、2～4mg/LKT、1mg/LZT、0.5～1mg/LTDZ的MS培養基上分化培養，得到再生苗。本發明通過對植物生長調節物質篩選、竹節大小位置、培養周期等優化篩選，促進竹節愈傷組織誘導與分化體系，建立高效再生體系，為建立花葉矢竹轉基因技術體系、定向改良培育新竹種提供技術支撐。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種竹節誘導愈傷組織再生植株的方法。

背景技術

竹子有著特殊的開花習性，開花周期長，難以預測，且開花后竹子通常會死亡，且結實率低(林樹燕等，2008)，難以通過有性繁殖途徑進行繁殖和選育新品種；無性繁殖又因長距離運輸困難、移栽存活率低、有限的生根能力及季節依賴等因素導致造林成本高。組織培養具有繁殖速度快、增殖系數高、花費少等優點，且不受季節限制，廣泛應用于植物的離體快繁(沈春修，2018；譚宏超等，2017)。植物遺傳育種改良可通過遺傳轉化技術，但建立一個穩定高效的再生體系是遺傳轉化技術成功的前提。目前關于遺傳轉化的報道僅限麻竹(Dendrocalamus latiflorus)(YES et al.,2017)、馬來甜龍竹(Dendrocalamus asper)(諸葛菲，2018)和梁山慈竹(Dendrocalamus farinosus)(李曉瑞等，2012)，主要原因是建立竹類再生體系困難。1968年，Alexander等首次利用離體培養技術，以竹子的成熟種胚為外植體成功獲得了完整植株。而后竹子的組織培養技術逐漸得到發展，目前已有近80多個竹種獲得再生植株(臧巧路等，2016)。Metha等(1982)首次報道了利用印度箣竹(Bambusaarundinacea)的體細胞胚胎建立其再生體系，而后研究出多種外植體來建立其再生體系，包括以種子為外植體的牡竹(Dendrocalamus strictus)(RAO et al.,1985)、墨西哥雨竹(Otatea acuminatea aztecorum)(Woods et al.1992)、麻竹(Sinocalamus latiflora)(Yeh et al.1987)、版納甜龍竹(Dendrocalamus hamiltoniiNees et Arn.exMunro)(張寧，2010)、孝順竹(Bambusa multiplex)(Yuan2009)、和馬來甜龍竹(Dendrocalamusasper)(諸葛菲2018)；以花藥為外植體的麻竹(D.latiflorus)(Tsay et al.1990)；以幼嫩花序為外植體的綠竹(Bambusaoldhami)(Yeh et al.1986)、孝順竹(B.multiplex)(袁金玲等，2009)、吊絲球竹(Bambusa beecheyana)(Yeh et al.1986)的；以芽為外植體的版納甜龍竹(Dendrocalamus hamiltonii Neeset Arn.ex Munro)(張寧等，2016)、綠竹(Bambusaoldhami)、翠竹(Sasa pygmaea)、鳳凰竹(Bambusa multiplex)、和羅漢竹(phyllostachysaurea)(Huang et al.1988)。但因為竹子特有的開花特性，種子和花藥獲取困難，不能隨時進行取材。而竹節居間分生組織材料充足，可隨時取材，外植體選擇有較大優勢。

關于竹子愈傷組織再生體系的報道仍舊很少，目前只集中在少數叢生竹和唯一的散生型竹種毛竹上，而混生型竹種的愈傷組織再生體系目前還尚未見報道，主要困難集中在可選擇能再生的外植體較少、有效愈傷組織誘導率低、愈傷組織分化困難，這些使竹種再生頻率非常低，與其他禾本科植物或模式植物無法比擬，大大限制基因功能驗證的研究進程。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種竹節誘導愈傷組織再生植株的方法，以竹節為外植體，配合獨特培養基配方誘導愈傷組織，取得了誘導率高且分化率高的再生植株。