[發明專利]一種云南松菌根苗的培育方法

有效

• 申請號: 202011113493.1
• 申請日: 2020-10-17
• 公開（公告）號: CN112273228B
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 張珊珊;楊文忠;陳劍
• 申請（專利權）人: 云南省林業和草原科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G17/00;A01G18/20;A01G18/40;A01G24/15;A01G24/28;A01G24/50
• 代理公司: 北京睿博行遠知識產權代理有限公司 11297
• 代理人: 龔家驊

1.一種云南松菌根苗的培育方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）菌種制備

采集青頭菌新鮮子實體，并在該青頭菌新鮮子實體上選取一塊組織作為培養組織塊，用接種針將其挑入綜合PDA培養基試管斜面，置于25℃培養箱內黑暗培養30 d，待長出菌絲轉接至MMN培養基繼續培養40 d，得到備用菌塊；

其中，所述綜合PDA培養基為：以1L計，包括：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，維生素10mg，瓊脂18g，121℃滅菌20min；

MMN培養基為：以1L計，包括：瓊脂15.0g，NaCl 0.025g，葡萄糖10g，檸檬酸0.20g，KH₂PO₄0.50g，麥芽浸粉3g，維生素B₁ 0.1mg，CaCl₂·2H₂O 0.05g，(NH₄)₂HPO₄ 0.25g，質量百分比濃度為1%的FeCl₃ 1.2 mL，MgSO₄·7H₂O 0.15g，pH 5.7±0.1；

（2）菌根苗的培育

于無菌條件下向組培瓶移入備用的提前萌發的云南松種子，待種子萌發長出幼根后，于每個組培瓶里根部周圍接入備用菌塊；用透氣隔菌膜封口后，置于光照培養室培養6個月，組培瓶用錫箔紙包裹以防菌種及根系直接暴露于光下；

所述組培瓶內裝有改良的MMN固體培養基，該改良的MMN固體培養基為：

以1L計，包括：酵母浸膏5g，麥芽浸粉3g，瓊脂16.0g，葡萄糖10g，蛋白胨2g，檸檬酸0.10g，NaCl 0.025g，KH₂PO₄ 0.50g，CaCl₂·2H₂O 0.5g，質量百分比濃度為1%的FeCl₃ 1.2mL，MgSO₄·7H₂O 0.15g，(NH₄)₂HPO₄ 0.25g，維生素B₁ 0.1mg，IBA 1.0 mg，NAA 0.10 mg，活性炭0.50g，pH 5.5-6.0；

（3）幼苗移栽

將經過經輻照滅菌的育苗基質裝入備用的育苗袋，所述育苗基質為體積比為1：1的蛭石和泥炭土的混合物，將步驟（2）得到的菌根苗移栽進所述育苗袋。

2.根據權利要求1所述的云南松菌根苗的培育方法，其特征在于，步驟（1）中所述培養組織塊的選取方式為：在青頭菌新鮮子實體的萌蓋和菌柄交界處或菌褶處，挑取一小塊組織，將其切成約1cm×1.5 cm大小、1.5 mm厚的組織塊作為培養組織塊。

3.根據權利要求1所述的云南松菌根苗的培育方法，其特征在于，在選取培養組織塊之前，還包括對青頭菌新鮮子實體的清潔步驟，具體為：小心去掉菌蓋及菌柄上粘連的泥土，再用75%的酒精棉球擦拭消毒2次。

4.根據權利要求1所述的云南松菌根苗的培育方法，其特征在于，所述青頭菌新鮮子實體為成熟度70%-80%、無病蟲害的青頭菌新鮮子實體。

5.根據權利要求1所述的云南松菌根苗的培育方法，其特征在于，步驟（2）中，向組培瓶里根部周圍接入的備用菌塊為面積為1cm²菌快，接入數量為3個。

6.根據權利要求1所述的云南松菌根苗的培育方法，其特征在于，步驟（2）中裝有所述改良的MMN固體培養基的組培瓶在使用前，須高溫高壓下滅菌20 min。

7.根據權利要求1所述的云南松菌根苗的培育方法，其特征在于，步驟（3）中所述育苗袋在使用前，須用10%的過氧化氫溶液進行消毒，然后用自來水沖洗，最后用無菌水沖洗后晾干水分后以備用。

8.根據權利要求1所述的云南松菌根苗的培育方法，其特征在于，步驟（3）中所述育苗袋底部鋪放有防止基質漏出的濾紙。