[發(fā)明專利]大麥SSR引物組及利用該引物組構(gòu)建啤酒大麥品種指紋圖譜的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711282054.1
• 申請(qǐng)日: 2017-12-07
• 公開（公告）號(hào): CN107881253A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳萍;趙明;李盼畔;劉明航;高舟;陸永躍;何洪洲;趙淑嘉;吳小瑤;劉姣姣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中華人民共和國(guó)南沙出入境檢驗(yàn)檢疫局
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司44001
• 代理人: 郝文婷,劉明星

1.大麥SSR引物組，其特征在于，包括9對(duì)大麥SSR引物HVHVA1、HVM70、HVMLOH1A、GBM1008、HVCMA、WMS6、HVPLASC1B、HVM65和HVM6，其核苷酸序列分別如SEQ ID NO:1～18所示。

2.權(quán)利要求1所述大麥SSR引物組在構(gòu)建啤酒大麥品種指紋圖譜中的應(yīng)用。

3.一種啤酒大麥品種指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、從啤酒大麥種子中提取DNA；

S2、將大麥SSR引物組和S1提取得到的DNA分別進(jìn)行SSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)，再將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管凝膠電泳檢測(cè)；

S3、將所述毛細(xì)管凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果轉(zhuǎn)化成啤酒大麥品種指紋圖譜；

所述大麥SSR引物組，包括9對(duì)大麥SSR引物HVHVA1、HVM70、HVMLOH1A、GBM1008、HVCMA、WMS6、HVPLASC1B、HVM65和HVM6，各引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:1～18所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的啤酒大麥品種指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，S1中，所述啤酒大麥種子分別為：Scarlett、Bambina、Quench、Irina、Sebastian、Esterel、Cervoise、Prestige、Etincel、Metcalfe、Copeland、Hindmarsh、Baudin、Scope、Buloke、Traveler、Bass、Westminster、La Trobe Trial、Vlamingh、Gairdner。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的啤酒大麥品種指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，S2中，所述SSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)采用20μl反應(yīng)體系，包括16μl mix、2μl引物、2μl DNA模板和6μl超純水；所述引物是將所述大麥SSR引物組中的一組按照1:9的體積比加入超純水稀釋并正反混合得到；

所述SSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)的程序?yàn)椋?℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，退火30s，72℃延伸45s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸7min，4℃保存；9對(duì)大麥SSR引物的退火溫度分別為：HVHVA1 52℃、HVM70 54℃、HVMLOH1A 46℃、GBM1008 50℃、HVPLASC1B 47℃、HVM65 47℃、HVCMA 50℃、HVM6 45℃、HVM63 53℃、WMS6 50℃。

6.一種啤酒大麥品種指紋圖譜，其特征在于，由權(quán)利要求3或4或5中任意一條權(quán)利要求所述啤酒大麥品種指紋圖譜的構(gòu)建方法構(gòu)建得到。

7.權(quán)利要求6所述啤酒大麥品種指紋圖譜在鑒定啤酒大麥品種中的應(yīng)用。

8.一種啤酒大麥品種的鑒定方法，其特征在于，其是通過權(quán)利要求6所述啤酒大麥品種指紋圖譜完成，包括如下步驟：

S101、從待鑒定啤酒大麥種子中提取DNA；

S102、將大麥SSR引物組和S101提取得到的DNA分別進(jìn)行SSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)，再將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管凝膠電泳檢測(cè)；

S103、將所述毛細(xì)管凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果與所述啤酒大麥品種指紋圖譜比對(duì)，即可得到待鑒定啤酒大麥種子的品種；

所述大麥SSR引物組，包括9對(duì)大麥SSR引物HVHVA1、HVM70、HVMLOH1A、GBM1008、HVCMA、WMS6、HVPLASC1B、HVM65和HVM6，各引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:1～18所示。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述啤酒大麥品種的鑒定方法，其特征在于，所述9對(duì)大麥SSR引物中的任意一對(duì)均可鑒定Scarlett、Bambina或Quench；所述9對(duì)大麥SSR引物中的

HVCMA+HVCMA+HVM6組合、HVCMA+HVCMA+HVM65組合、HVCMA+HVCMA+GBM1008組合、HVCMA+HVCMA+HVMLOH1A組合中的任意一個(gè)組合可鑒定Irina、Sebastian、Esterel、Cervoise、Prestige或Etincel；所述9對(duì)大麥SSR引物中的HVHVA1+HVM70+HVMLOH1A組合可鑒定Metcalfe、Copeland、Hindmarsh、Baudin、Scope、Buloke、Traveler、Bass、Westminster、La Trobe Trial、Vlamingh或Gairdner。