[發(fā)明專利]大麥SSR引物組及利用該引物組構(gòu)建啤酒大麥品種指紋圖譜的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711282054.1
• 申請日: 2017-12-07
• 公開（公告）號: CN107881253A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳萍;趙明;李盼畔;劉明航;高舟;陸永躍;何洪洲;趙淑嘉;吳小瑤;劉姣姣
• 申請（專利權(quán)）人: 中華人民共和國南沙出入境檢驗(yàn)檢疫局
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司44001
• 代理人: 郝文婷,劉明星

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，本發(fā)明涉及利用SSR技術(shù)并結(jié)合毛細(xì)管電泳技術(shù)構(gòu)建主要進(jìn)口啤酒大麥品種的SSR指紋圖譜的方法。

背景技術(shù)

啤酒大麥?zhǔn)瞧【粕a(chǎn)的主要原料，大麥的質(zhì)量直接影響啤酒的品質(zhì)和口感；而大麥的質(zhì)量受品種、產(chǎn)區(qū)、氣候條件等因素的影響，大麥不同品種之間的淀粉、蛋白質(zhì)、β-葡聚糖以及酶系活性等均存在一定差異，這些差異直接影響麥芽制造和啤酒釀造工藝。因此，大麥品種的真實(shí)性及純度是啤酒釀造的關(guān)鍵。

目前，中國已成為世界上最大的啤酒生產(chǎn)國(劉慧，薛鳳蕊.中國大麥貿(mào)易現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J].農(nóng)業(yè)貿(mào)易展望，2015,8:66-69.)。隨著我國啤酒產(chǎn)量的不斷增長，國產(chǎn)大麥產(chǎn)量及質(zhì)量難以滿足市場需求，啤酒大麥的進(jìn)口量迅猛增長，位列進(jìn)口谷物前3位，2013-2014年度進(jìn)口量達(dá)到歷史最高的489.1萬t(李先德，孫志勝，張京.2014年世界和中國大麥與貿(mào)易形勢及2015年展望[J].農(nóng)業(yè)生產(chǎn)展望，2015,2:43-47.)。近年來，我國啤酒大麥主要進(jìn)口國主要為澳大利亞、加拿大和法國；在國際貿(mào)易中，大麥品種是優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)的，不同品種的價(jià)格相差數(shù)十美元/噸；一般情況下買賣雙方會在貿(mào)易合同中對大麥品種以及品質(zhì)指標(biāo)等進(jìn)行標(biāo)注和規(guī)定，如澳大利亞的Gairdner、加拿大的Metcalfe、法國的Sebastian等等，如果進(jìn)口的大麥與合同規(guī)定的品種不符或品種不純導(dǎo)致大麥質(zhì)量下降，則不但使我國在對外貿(mào)易中蒙受直接經(jīng)濟(jì)損失，也使我國啤酒工業(yè)遭受間接經(jīng)濟(jì)損失。所以，準(zhǔn)確鑒別大麥品種是進(jìn)口啤酒大麥品質(zhì)檢驗(yàn)中非常重要的工作，屬于法定檢驗(yàn)項(xiàng)目；然而，對于進(jìn)口啤酒大麥品種的鑒定工作在質(zhì)檢系統(tǒng)內(nèi)開展非常少。因此，開展進(jìn)口啤酒大麥品種鑒定工作對于避免貿(mào)易經(jīng)濟(jì)損失、保證啤酒大麥質(zhì)量及提高啤酒釀造業(yè)的生產(chǎn)效益等方面具有重要意義。

啤酒大麥的品種鑒定方法主要包括根據(jù)大麥形態(tài)特征進(jìn)行鑒定的感官檢驗(yàn)法和醇溶蛋白電泳法，但是由于感官檢驗(yàn)法主觀誤差大，醇溶蛋白電泳法染色效果差、條帶圖像不容易判別等問題，這些方法不能滿足實(shí)際的工作需要。DNA分子標(biāo)記技術(shù)為大麥品種及純度鑒定工作提供更大的研究手段和空間。Bunce(徐阿炳，朱睦元，袁妙葆等.RFLP技術(shù)及其在大麥研究中的應(yīng)用[J].大麥科學(xué)，1991.2:5-12 4)等(1986)利用RFLP技術(shù)與SDS-PAGE對6種大麥品種鑒定進(jìn)行比較分析；吳亞君(吳亞君，王斌，韓建勛等.采用RAPD-毛細(xì)管芯片電泳法鑒定啤酒大麥品系[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2012,38(2)：174-180.)等采用RAPD-毛細(xì)管芯片電泳法對19個(gè)啤酒大麥品系進(jìn)行鑒定；初雷(初雷.釀酒大麥種質(zhì)資源AFLP分子指紋圖譜構(gòu)建.[D]大連工業(yè)大學(xué)，碩士論文，2011.)利用AFLP技術(shù)對27種國內(nèi)外釀造大麥品種進(jìn)行鑒定研究；SSR標(biāo)記技術(shù)的原理是根據(jù)SSR兩側(cè)的序列相對保守的特性，設(shè)計(jì)特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)串聯(lián)重復(fù)單位數(shù)目的差異檢測多態(tài)性。SSR標(biāo)記對DNA需求量少，多態(tài)性高，結(jié)果穩(wěn)定可靠等優(yōu)點(diǎn)，在大麥品種及純度鑒定等方面的研究已有相關(guān)報(bào)道。RUSSELJR(RUSSELJR，F(xiàn)ULLERJD，MACAULAYM.Direct comparisons of level of genetic variation among barley accessions detected by RFLPs，AFLPs，SSRs，and RAPD[G].Symposiam：V International Oat conference and VII International Barley Genetics，1996.)等僅用11個(gè)SSR標(biāo)記就區(qū)分了包括相同系譜來源在內(nèi)的24個(gè)大麥基因型，并利用4對SSR標(biāo)記區(qū)分這24種大麥品種。楊振華(楊振華.啤酒大麥SSR分子標(biāo)記PCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué).2015(5)：26-28.)利用正交設(shè)計(jì)，摸索適用于啤酒大麥遺傳分析的SSR-PCR最佳反應(yīng)體系。