[發明專利]一種從海參中提取巖藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸軟骨素的方法

有效

• 申請號: 202011107485.6
• 申請日: 2020-10-16
• 公開（公告）號: CN112175107B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 趙雪;王莉;張鴻偉;張曉梅;安子哲;盧海燕
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08;C08B37/00
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

本發明提供一種從海參中同步提取巖藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸軟骨素的方法，更有效的利用海參組織中巖藻聚糖硫酸酯和硫酸軟骨素的結構和水溶性不同，完成海參中兩種硫酸多糖的提取和分離。本發明方法具有提取條件溫和、過程簡便的優勢，有效的從海參中將硫酸軟骨素和巖藻聚糖硫酸酯進行提取和分離純化；節省了海參中巖藻聚糖硫酸酯和硫酸軟骨素的離子色譜分離、凝膠色譜純化和脫鹽等步驟，大大簡化了海參中巖藻聚糖硫酸酯和硫酸軟骨素的分離純化工藝。本發明方法成本低廉、容易擴大、回收率高，是一種綠色環保的大規模制備海參巖藻聚糖硫酸酯和硫酸軟骨素兩種硫酸多糖純品的方法。

技術領域

本發明屬于分離純化技術領域，具體涉及一種從海參中提取和分離巖藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸軟骨素的方法。

背景技術

海參是棘皮動物門海參綱海參屬生物，是一種富含蛋白、多糖、皂苷等活性物質的海珍品。海參體壁中富含硫酸多糖，主要是巖藻聚糖硫酸酯和巖藻糖基硫酸軟骨素兩種硫酸多糖組成。海參巖藻聚糖硫酸酯是巖藻糖以α1→3或α1→4鍵連接形成的直鏈大分子硫酸多糖，具有少量巖藻糖側鏈，分子量一般都大于500-700kDa。海參硫酸軟骨素是海參中特有的一種具有巖藻糖支鏈的硫酸軟骨素，由葡萄糖醛酸和乙酰氨基半乳糖重復二糖單元組成，以β-1,4-和β-1,3糖苷鍵連接而成，乙酰氨基半乳糖和葡萄糖醛酸上有硫酸化的巖藻糖支鏈，分子量在80-120kDa。海參硫酸軟骨素的硫酸根含量大于30％，遠遠高于巖藻聚糖硫酸酯，因此具有更好的抗凝血和抗血栓活性。

海參中巖藻聚糖硫酸酯和硫酸軟骨素是兩種結構和生物活性不同的硫酸多糖，因此需要分離純化。目前采用的蛋白酶酶解、水提取的方法可以從海參中提取的海參硫酸多糖為巖藻聚糖硫酸酯和硫酸軟骨素的混合物，因此還需要對兩種硫酸多糖進行分離。目前，分離純化巖藻聚糖硫酸酯和硫酸軟骨素主要采用乙醇分級分離、鹽分級分離、離子交換色譜法、雙水相萃取和凝膠色譜柱層析法。而最常用的方法是陰離子交換柱層析法和雙水相萃取法，這兩種方法會混合大量的鹽，除鹽工作量大，而且陰離子柱價格昂貴。乙醇分級分離和鹽分級分離海參硫酸多糖，分離效率比較低，產品純度低。而凝膠色譜法每次處理的樣品量太低，無法實現大規模生產。

發明內容

針對現有技術中海參巖藻聚糖硫酸酯和硫酸軟骨素提取和分離純化技術的不足，本發明提供一種從海參中同步提取巖藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸軟骨素的方法，更有效的利用海參組織中巖藻聚糖硫酸酯和硫酸軟骨素的結構和水溶性不同，完成海參中兩種硫酸多糖的提取和分離。

本發明所提供的從海參中提取巖藻聚糖硫酸硫酸酯和硫酸軟骨素的方法，包括如下的步驟：

1)海參預處理：

將海參進行組織破碎后加入蒸餾水進行浸提，浸提結束后進行離心，取沉淀待用；

所述的海參與水的質量比為1:5-1:10；

所述的蒸餾水進行浸提，是在30-50℃攪拌浸提30-60min。

2)水溶液提取和分離：

將步驟1)離心獲得的沉淀中加入Tris-HCl水溶液進行提取，提取結束后離心，收集提取液和沉淀；

所述Tris-HCl水溶液，其一種實施例的具體記載是濃度為0.1-0.3mol/L，pH8.0，含有4mmol/L EDTA；

所述的提取，是在30-50℃緩慢攪拌提取12-24h；

3)將步驟2)獲得的提取液真空濃縮后，加入氯化十六烷基吡啶進行沉淀，離心收集沉淀；沉淀溶解于添加了NaCl的醇溶液中；然后用90％乙醇水溶液進行沉淀、冷凍干燥后得海參巖藻聚糖硫酸酯干品；

所述的添加了NaCl的醇溶液，其一種是添加了3mol/L氯化鈉的86％乙醇溶液；

所述的用于沉淀的乙醇水溶液，其一種是90％乙醇水溶液；