[發(fā)明專利]一種百香果離體快繁及遺傳轉(zhuǎn)化方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011106774.4 | 申請日： | 2020-10-16 |
| 公開（公告）號： | CN112106662B | 公開（公告）日： | 2022-12-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 何銳杰;曾黎輝;余偉軍 | 申請（專利權(quán)）人： | 福建農(nóng)林大學 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100 | 代理人： | 饒文君;蔡學俊 |
| 地址： | 350002 福建省福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 百香果離體快繁 遺傳 轉(zhuǎn)化 方法 | ||
1.一種百香果離體快繁及遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：
（1）無菌外植體的大量快速獲取：將種子從果實中剝離出來后清洗干凈，浸種72h，然后一穴一粒種植于128孔穴盤中，基質(zhì)為經(jīng)過高壓滅菌的純蛭石；將穴盤置于28-32℃的環(huán)境中，種子15日之后萌發(fā)；待子葉剛剛展開時截取胚軸至莖尖部分并沖洗干凈，置于飽和洗衣粉水中浸泡20min，然后使用流水沖洗30min，后續(xù)步驟在超凈工作臺中完成；將材料用75%w/v酒精浸泡30s，無菌雙蒸水沖洗2次，然后使用7.5% w/v的次氯酸鈉溶液浸泡10min，期間不斷晃動瓶身，完成后使用無菌雙蒸水沖洗3-6次，將外植體接種于生長培養(yǎng)基中生長；30天后芽苗長大，截取無菌苗節(jié)間莖段作為快繁外植體；
（2）離體快繁方法：快繁外植體接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天，然后轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基中誘導叢生芽，將叢生芽切下轉(zhuǎn)移至生根壯苗培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，獲得組培苗；在移植前2天將生長健壯的組培苗瓶蓋打開進行煉苗，移栽前使用自來水沖洗根部殘留培養(yǎng)基，然后移栽到泥炭土與珍珠巖的質(zhì)量比例為7∶3的混合基質(zhì)中進行培養(yǎng)，獲得無菌苗；
（3）遺傳轉(zhuǎn)化方法：以步驟（2）中無菌苗的莖段為侵染材料，先將侵染材料在愈傷組織誘導培養(yǎng)基中進行預培養(yǎng)3天，侵染時將侵染材料浸泡在農(nóng)桿菌侵染液中15min，期間不斷晃動瓶身；然后轉(zhuǎn)移至不含任何抗生素的愈傷組織誘導培養(yǎng)基中共培養(yǎng)3天，后轉(zhuǎn)移到含有300mg/L羧芐青霉素的愈傷組織誘導培養(yǎng)基中延遲培養(yǎng)7天，然后將愈傷組織轉(zhuǎn)移到含有50mg/L卡那霉素與300mg/L羧芐青霉素的分化培養(yǎng)基中分化叢生芽并進行篩選培養(yǎng)，獲得陽性外植體，最后將陽性外植體轉(zhuǎn)移至含有50mg/L卡那霉素與300mg/L羧芐青霉素的生根壯苗培養(yǎng)基進行培養(yǎng)；
所述生長培養(yǎng)基為MSM + 0.25mg/L TDZ + 0.1 mg/L IBA+ 2wt.%蔗糖；所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為MSM + 0.25mg/L TDZ + 0.5 mg/L IBA+ 2wt.%蔗糖；所述分化培養(yǎng)基為MSM+ 0.5mg/L TDZ + 0.1 mg/L IBA+ 2wt.%蔗糖；所述生根壯苗培養(yǎng)基為MSM + 2wt.%蔗糖。
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