[發(fā)明專利]與Pol II和Pol III親和力增強(qiáng)的H1啟動(dòng)子

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011106108.0
• 申請(qǐng)日: 2020-10-16
• 公開（公告）號(hào): CN111926019B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊興林;賈國(guó)棟;楊佳麗;詹霞;高花
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 和元生物技術(shù)（上海）股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/864;C12N15/90
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 劉陽(yáng)

1.截短的H1啟動(dòng)子，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。

2.H1啟動(dòng)子，其特征在于，由權(quán)利要求1所述的截短的H1啟動(dòng)子的5′端與SEQ ID NO:3的3′端起的第1位到第1~124任意位核苷酸相連得到。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的H1啟動(dòng)子，其特征在于，核苷酸序列為SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:5所示。

4.基因表達(dá)盒，其特征在于，包含啟動(dòng)子和由所述啟動(dòng)子所啟動(dòng)的DNA片段；

所述DNA片段用于轉(zhuǎn)錄RNA聚合酶II專一性RNA和/或RNA聚合酶III專一性RNA；

所述啟動(dòng)子為權(quán)利要求1所述的截短的H1啟動(dòng)子，或權(quán)利要求2或3所述的H1啟動(dòng)子。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基因表達(dá)盒，其特征在于，所述RNA聚合酶II專一性RNA為mRNA和/或snRNA。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基因表達(dá)盒，其特征在于，所述mRNA用于表達(dá)Cas酶。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的基因表達(dá)盒，其特征在于，所述Cas酶是Cas9。

8.根據(jù)權(quán)利要求4~7任一項(xiàng)所述的基因表達(dá)盒，其特征在于，所述RNA聚合酶III專一性RNA為5S rRNA、tRNA、shRNA、miRNA、gRNA、crRNA、tracrRNA和snRNA中的至少一種。

9.根據(jù)權(quán)利要求4~7任一項(xiàng)所述的基因表達(dá)盒，其特征在于，還包含報(bào)告基因、增強(qiáng)子、內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)、終止子和多腺苷酸化信號(hào)中的至少一種。

10.載體，其特征在于，包含權(quán)利要求4~9任一項(xiàng)所述的基因表達(dá)盒。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的載體，其特征在于，所述載體為腺相關(guān)病毒。

12.宿主細(xì)胞，其特征在于，含有權(quán)利要求4~9任一項(xiàng)所述的基因表達(dá)盒或權(quán)利要求10或11所述載體的真核細(xì)胞，所述真核細(xì)胞為動(dòng)物或真菌細(xì)胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

14.改變真核細(xì)胞中基因產(chǎn)物表達(dá)的方法，其特征在于，包括將載體引入所述真核細(xì)胞中，所述載體包含啟動(dòng)子，其可操作連接至編碼Ⅱ型CRISPR-Cas系統(tǒng)的gRNA和Cas酶的DNA片段，并用于啟動(dòng)所述DNA片段的轉(zhuǎn)錄；

所述啟動(dòng)子為權(quán)利要求1所述的截短的H1啟動(dòng)子，或權(quán)利要求2或3所述的H1啟動(dòng)子；

所述gRNA有一種或多種，其與所述基因產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的DNA分子的靶序列雜交；

其中所述gRNA靶向所述靶序列且與所述靶序列雜交，所述Cas酶切割所述DNA分子以改變一種或多種基因產(chǎn)物的表達(dá)；

所述方法為非治療目的。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述Cas酶為Cas9。