[發明專利]一種胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II聯合定量檢測試紙的制備方法及其檢測方法

有效

• 申請號: 202011103908.7
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN112255403B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 陳一凡;張翔;胡容;陳永晨;孫志枚;楊茂林;張海龍;許大文
• 申請（專利權）人: 安徽惠邦生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/558;G01N33/551;G01N33/532;G01N33/52
• 代理公司: 昆明合眾智信知識產權事務所 53113
• 代理人: 葉春娜

本發明公開一種胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II聯合定量檢測試紙的制備方法及其檢測方法，包括以下步驟：步驟一：制備羧基修飾石墨烯/InP/CdS量子點：a.制備InP量子點溶液；b.配制巰基乙酸修飾鎘鹽前體溶液；c.制備羧基修飾石墨烯/InP/CdS量子點溶液；步驟二：制備樣品墊；步驟三：制備標記墊：a.活化量子點溶液；b.制備復合抗體量子點標記液；c.制備標記墊：將標記液直接噴涂于玻璃纖維素膜上，噴膜濃度為2.5μl/cm，于37℃烘干，得到標記墊；步驟四：制備抗體包被的劃線NC膜；步驟五：組裝檢測試紙。本發明首次利用羧基修飾量子點標記抗體，量子點表面大量的羧基與抗體中氨基反應，通過肽鍵的形式使二者穩定連接，最大限度地帶動標記量，提高其靈敏度。

技術領域

本發明屬于量子點免疫層析檢測技術領域，具體涉及一種胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II聯合定量檢測試紙的制備方法及其檢測方法。

背景技術

胃蛋白酶原始胃液中胃蛋白酶的無活性前體，由胃體的主細胞和黏液細胞分泌，大部分分泌到胃腔，少量可在血液中被檢測到。根據其生化性質和免疫原性將其分成2個亞群，1-5組分的免疫原性相同，稱為胃蛋白酶原I，主要由胃底腺的主細胞和黏液頸細胞分泌；組分6和7被稱為胃蛋白酶原II，除由胃底腺的主細胞和黏液頸細胞分泌外，賁門腺和胃竇的幽門腺的黏液頸細胞以及十二指腸上段也能產生胃蛋白酶原II。血清和血漿中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II比值的降低與胃體萎縮的嚴重程度呈正相關，中、重度萎縮性胃炎時，其比值為＜0.3，其胃癌的發病率顯著增加，因此，聯合測定胃蛋白酶原I核胃蛋白酶原II比值可起到早期胃癌風險提示的作用，通過其血清測量值的不同，在各胃部疾病中均有不同程度的改變，為臨床提供可靠的診斷價值。

目前臨床胃部疾病及胃癌的檢測方法主要包括內窺鏡、B超、X線檢測、腫瘤標志物等。X線作為傳統的胃癌檢測手段，對進展期胃癌或彌散型胃癌更有診斷價值，但此法存在射線暴露，檢查費用較高等問題，而且對早期胃癌的判定顯得無能為力；內窺鏡費用較高，對操作人員的技術要求高，而且下胃鏡又令患者很痛苦，結果使不少患者望而卻步，對亞臨床癥狀患者尚不能作為普查手段；與胃癌有關的腫瘤標志物對于普通胃病及早期胃癌的診斷價值不大。目前已建立多種檢測方法，如酶聯免疫法、化學發光法、免疫比濁法等，酶聯免疫吸附法檢測精確，能準確定量，具有很高的敏感性，但是檢測樣品需要加樣、溫浴、洗滌、顯色、終止等步驟，操作程序繁瑣，耗時長，樣品從處理到得到結論需要至少40分鐘，不適合大規模的體檢篩查，樣品檢測需要洗板機和酶標儀，攜帶不便，因而不能在病人家庭或急救車上進行檢測，另外其敏感性、特異性不夠高，對低濃度樣品檢測的準確度不高。而化學發光免疫測定，雖然精確度高，檢測速度快，但檢測需要昂貴的化學發光免疫分析儀，要求特定的分析室，且其試劑成本也較高,無法廣泛用于較基層的意愿和醫療機構中。相比其他胃部檢測手段,血清PGI/PGII聯合檢測具有無創傷、簡便、可靠和費用低廉等優點，熒光免疫層析法相比酶聯免疫吸附法和化學發光免疫測定，檢測靈敏度高、準確度高、操作簡便、成本低，因而具有更大的產業價值。

量子點(簡稱QDs，又稱半導體納米粒子)是由II～VI族或III～V族元素組成的，半徑小于或接近于激光波爾半徑，能夠接受激發光產生熒光的一類半導體納米顆粒，其中研究較多的主要是CdX(x＝S、Se、Te)，直徑約為2nm～6nm，存在顯著的量子尺寸效應和表面效應，熒光強度高，激發光譜寬，發射光譜較窄且呈對稱分布使得量子點可以用于多種組分的多色標記，實現多組份同步檢測，但現有技術，主要通過將量子點或量子點與高聚物的復合物和抗體直接混合，進行標記，標記穩定性差，抗體有效標記量低，致使量子點熒光標記的精密度有待進一步提高。如申請號為CN201610327064.1的專利，公開一種胃功能檢測用免疫層析試劑盒及其制備方法，利用量子點-改性環糊精-膠乳復合物懸濁液標記胃蛋白酶原I抗體。

發明內容

針對現有技術的不足之處，本發明的目的在于提供一種胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II聯合定量檢測試紙的制備方法及其檢測方法。

本發明的技術方案概述如下：