[發明專利]無血清培養基及其在間充質干細胞傳代培養中的應用

在審

• 申請號: 202011102735.7
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN112210532A
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 陳東煌;陳海佳;王小燕;姜交華;戚康藝
• 申請（專利權）人: 生物島實驗室;廣東國科細胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發明涉及干細胞培養技術領域，尤其涉及無血清培養基及其在間充質干細胞傳代培養中的應用。本發明提供的添加劑適用于制備間充質干細胞多次傳代及有效維持干性的無血清培養基，可有效改善間充質干細胞傳代及擴增能力不足的缺點，為未來干細胞產品實現規模化、標準化、產業化提供穩定的基礎材料。實驗表明，采用本發明的添加劑不僅能夠促進間充質干細胞的擴增和傳代，還能很好的維持間充質干細胞表面標記物的表達，細胞干性得到有效維持。

技術領域

本發明涉及干細胞培養技術領域，尤其涉及無血清培養基及其在間充質干細胞傳代培養中的應用。

背景技術

干細胞及其代表的再生醫學領域研究近二十年來不斷取得重大技術突破，引發了人們對干細胞技術產業化及臨床應用的高度重視。截止到2019年，全球已有16款干細胞產品上市，其中間充干細胞(Mesenchymalstemcells,MSCs)由于具有多種優點而成為產品最多，發展最為迅猛的干細胞類型。間充質干細胞來源于發育早期的中胚層，是一類非造血干細胞，其廣泛存在于骨髓、皮下脂肪、骨外膜、肌肉、滑膜、滑液、肝臟、外周組織、臍帶、臍帶血及胎盤等組織。MSCs具有高度自我更新能力、多向分化潛能，可在體外培養擴增，不僅能夠支持造血干細胞的生長，還具有免疫調控的作用；不同的誘導條件下，在體外可分化為骨、軟骨、肌肉、神經、心肌、內皮和脂肪等，連續傳代培養和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復。因此，MSCs具有廣闊的臨床應用前景，是細胞替代治療和組織工程的首選種子細胞，是移植領域和自身性免疫疾病治療的研究熱點。

在生物醫學工程領域的研究中，大量種子細胞的獲取往往需要通過干細胞的體外培養和收獲來實現。目前間充質干細胞培養使用有血清培養基或無血清培養基。有血清培養基大都含有動物血清，如最為常見的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)。FBS成分復雜且含有異種蛋白質，容易攜帶病毒或被支原體感染等。另一方面，FBS批間差異較大，來源不穩定，對體外大規模擴增MSCs工藝影響較大。

無血清培養基(Serum-Free Medium，SFM)，顧名思義是指在細胞培養中不需要添加動物或人源血清。但為了滿足細胞生長的要求，通常會向培養基中添加替代血清功能的原料，主要包括結合蛋白、生長因子、粘附因子、激素、微量元素等加大類別。但目前階段間充質干細胞的無血清培養基產品均具有細胞傳代及擴增能力不足的缺點，難于滿足目前行業內對規模化、標準化、產業化的，可臨床應用的間充質干細胞相關技術與產品的需求，這也是目前SFM研發企業急需突破的瓶頸。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供無血清培養基及其在間充質干細胞傳代培養中的應用，該無血清培養基中的添加劑組成合理，能夠有效改善間充質干細胞傳代及擴增能力不足的缺點。

本發明提供了一種添加劑，其包括：MEMNon-EssentialAmino Acids Solution、MEMVitamin Solution、Chemically defined lipid concentrate、Trace elementssolution、L-谷氨酰胺、L-谷胱甘肽、L-抗壞血酸、氫化可的松、雌二醇、孕酮、人血白蛋白、胰島素、轉鐵蛋白、bFGF、EGF、PDGF-BB、Wnt-3a、TGF-β1、纖連蛋白、乙醇胺、腺嘌呤、亞硒酸鈉和β-巰基乙醇。

本發明提供的添加劑中各種組分的存儲濃度為工作濃度的1～100倍，各組分工作濃度為：

本發明還提供了一種無血清培養基，其包括基礎培養基和如下濃度的組分：

一些實施例中，所述培養基包括基礎培養基和如下濃度的組分：