[發明專利]一種跨膜表達新型冠狀病毒抗原的細胞的制備方法、細胞和應用有效
| 申請號： | 202011102574.1 | 申請日： | 2020-10-15 |
| 公開（公告）號： | CN112251413B | 公開（公告）日： | 2021-05-14 |
| 發明（設計）人： | 焦順昌;張嶸;袁翰;張艷玲;李斯慧;馮向輝;宋文靜;呂鵬敏;鐘宏東;胡坤 | 申請（專利權）人： | 焦順昌;北京鼎成肽源生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/85;C12N15/50;A61K39/215;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 呂紀濤 |
| 地址： | 102200 北京市昌平區雙*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 新型 冠狀病毒 抗原 細胞 制備 方法 應用 | ||
1.一種跨膜表達新型冠狀病毒抗原的細胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)將序列通過Bsu36I和BmgBI雙酶切位點整合到質粒中，得到PB-S-RBD-NGFR質粒；所述序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
2)將所述步驟1)得到的PB-S-RBD-NGFR質粒電轉化到K562細胞中，經嘌呤霉素篩選，當活細胞比例持續大于80％時，得到跨膜表達新型冠狀病毒抗原的細胞。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)嘌呤霉素篩選時的使用濃度為5μg/ml。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)電轉化的條件包括：560V、30ms。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)PB-S-RBD-NGFR質粒的質量與K562細胞的數量比為10μg:1×107cells。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)篩選的時間在7d以上。
6.一種基于權利要求1～5任一項所述的制備方法制備得到的跨膜表達新型冠狀病毒抗原的細胞，所述細胞的細胞膜上表達信號肽、新型冠狀病毒刺突糖蛋白的受體結合結構域和跨膜蛋白結構域；
所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述新型冠狀病毒刺突糖蛋白的受體
結合結構域的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，所述跨膜蛋白結構域的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
7.根據權利要求6所述的細胞，其特征在于，編碼信號肽的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。
8.據權利要求6所述的細胞，其特征在于，編碼新型冠狀病毒刺突糖蛋白的受體結合結構域的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
9.據權利要求6所述的細胞，其特征在于，編碼跨膜蛋白結構域的核苷酸序列如SEQ IDNo.7所示。
10.權利要求6～9任一項所述的細胞在制備新型冠狀病毒抗體中的應用。
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