[發(fā)明專利]大黃魚抗腫瘤肽piscidin 5 like及其制備方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011101824.X
• 申請(qǐng)日: 2020-10-15
• 公開（公告）號(hào): CN112266917A
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭利兵;蘇永全;遲長(zhǎng)鳳;潘瀅;陳佳;鄭煒豪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建福鼎海鷗水產(chǎn)食品有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C07K14/46;C12N15/70;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

大黃魚抗腫瘤肽piscidin 5 like及其制備方法與應(yīng)用，涉及大黃魚抗菌肽。在分離得到Lc?p5L的基礎(chǔ)上，根據(jù)Lc?p5L基因序列特征成功構(gòu)建重組表達(dá)載體并在大腸桿菌系統(tǒng)中表達(dá)并純化獲得重組rLc?p5L蛋白，構(gòu)建了Lc?P5L的pET?28a重組表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化至宿主細(xì)胞E.coli BL21(DE3)中，在宿主細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到表達(dá)產(chǎn)物，并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，從而得到重組蛋白rLc?P5L。具有表達(dá)產(chǎn)量較高，生物活性強(qiáng)，表達(dá)系統(tǒng)簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，無(wú)毒害物質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，適用于大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)，可為人工修飾成為更具高抗腫瘤活性的物質(zhì)提供理論數(shù)據(jù)和支撐。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及大黃魚抗菌肽，尤其是涉及大黃魚抗腫瘤肽piscidin 5 like及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著對(duì)抗菌肽(antimicrobial peptides)研究的發(fā)展，學(xué)者發(fā)現(xiàn)抗菌肽是一類最有希望能完全或部分替代抗生素的候選物。抗菌肽靶向細(xì)胞膜的獨(dú)特作用方式幾乎不會(huì)引起抗性的產(chǎn)生。因此，在過去的若干年里，大量的工作和努力致力于對(duì)抗菌肽的研究^[1-3]，并且越來(lái)越多的抗菌肽被從細(xì)菌、動(dòng)物、植物中分離出來(lái)。其中生物多樣性較高的海洋生物是豐富的抗菌肽的重要來(lái)源。

研究發(fā)現(xiàn)一些抗菌肽具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性^[4]，且具有很大的潛力發(fā)展成為一種藥物。我們都知道，癌細(xì)胞細(xì)胞膜上的能量依賴型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，如P-葡糖蛋白，使一些已經(jīng)存在的抗癌藥物(如阿霉素或vinca alkaloids)變得無(wú)效，因?yàn)楂@得抗性的P-葡糖蛋白能夠降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度^[5]。尤其耐藥性的產(chǎn)生逐漸在世界范圍內(nèi)都引發(fā)了對(duì)腫瘤或炎癥治療失敗的擔(dān)憂。以前的研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞或細(xì)菌的細(xì)胞膜攜帶有更多的凈負(fù)電荷，如磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，PS)^[6]、O-糖基化粘蛋白(O-glycosylated mucins)^[7]、脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)、脂磷壁酸(lipoteichoic acid，LTA)。大部分的抗菌肽、或稱之為抗腫瘤肽(anticancer peptides，ACPs)擁有兩親性結(jié)構(gòu)、有限結(jié)合并插入到帶負(fù)電的細(xì)胞膜以破壞細(xì)胞或線粒體膜^[8-9]，因此，不難理解為什么陽(yáng)性肽更容易靶向并破壞腫瘤細(xì)胞、病原菌細(xì)胞膜。類似于抗菌機(jī)制，ACPs的抗腫瘤作用機(jī)制也是多樣的。比如CS5931能夠激活HCT-8細(xì)胞的caspase 9and 3表現(xiàn)出顯著的抗增殖、促凋亡活性^[10]；Pleurocidin家族的NRC-03、NRC-07成員能夠裂解乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞膜^[11]；Kahalalide F通過消耗乳腺癌細(xì)胞系SKBR3的ErbB3(human epidermal growth factor receptor 3)和抑制Akt(proteinkinase B)信號(hào)引起細(xì)胞的壞死樣死亡^[12]；Magainin 2或tachyplesin能夠通過線粒體通路激活caspase-9/3誘導(dǎo)凋亡^[13-14]；A₉K可穿透進(jìn)入HeLa細(xì)胞影響F-actin的重建，進(jìn)而引起線粒體的功能紊亂^[15]。

Piscidins擁有多樣的抗性活性，包括抗菌、抗寄生蟲、抗病毒、抗腫瘤活性。大黃魚piscidin-like(Lc-pis)能夠結(jié)合到HeLa細(xì)胞上并引起其死亡，Lc-pis主要聚集在核膜的周圍，人工修飾Lc-pis的正電荷增強(qiáng)了該效應(yīng)，然而，負(fù)電荷消除了聚集效應(yīng)，因此Lc-pis具有抗腫瘤活性^[16]。體外重組表達(dá)大黃魚piscidin 5 like的抗腫瘤活性的檢測(cè)對(duì)于豐富海洋生物源抗腫瘤候選肽提供基礎(chǔ)參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：